高效液相色谱法测定酸枣仁样品中皂苷A和B含量.docVIP

高效液相色谱法测定酸枣仁样品中皂苷A和B含量 　　摘要：采用索式提取法提取相同产地32种酸枣（Zizyphus jujube）仁中的皂苷A、B，并以高效液相色谱（HPLC）法测定其含量。结果表明，不同品种酸枣仁皂苷A及B含量有一定差异，以8号酸枣仁皂苷A含量最高，14号酸枣仁皂苷A含量最低，26号酸枣仁皂苷B含量最高，14号酸枣仁皂苷B含量最低，26号和1002号的酸枣仁皂苷A的含量差异不大，但酸枣仁皂苷B的含量有较大差异。以酸枣仁皂苷A和B能够较为全面评价酸枣仁的皂甙水平。 　　关键词：酸枣（Zizyphus jujube）；酸枣仁皂苷；高效液相色谱 　　中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）10-2405-03 　　鼠李科植物酸枣（Ziziphus jujube Mill var.spinosa（Bunge）Hu ex H.F.chou）在中国主要分布于陕西、山东、湖北、河南、安徽、辽宁、华北等地。酸枣仁是其干燥成熟种子，其味酸性平，具有养肝宁心、安神敛汗功能，主治虚烦不眠、惊悸多梦、体虚多汗、津伤口渴等症，常作为安神药[1]。据报道酸枣仁中含有多种功能性化合物[2-4]，其中具有镇静催眠活性的化合物主要包括三萜皂苷和黄酮类化合物，其中酸枣仁皂苷A及B为其中主要有效成分[5，6]，但由于产地不同，其含量差异极大。本试验采用高效液相色谱法分析河北邢台产的32个品种酸枣仁样品中的酸枣仁皂苷A和B含量，为邢台酸枣仁的综合开发利用提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与试剂 　　酸枣仁样品由河北农业大学理学院提供；酸枣仁对照品购于上海顺勃生物工程有限公司。 　　色谱纯乙腈，购于Fisher公司；甲醇、石油醚、正丁醇、氨水均为分析纯，购于国药集团化学试剂有限公司。 　　1.2 仪器 　　1200型高效液相色谱仪（Agilent，美国），配备二元梯度泵，紫外检测器，色谱工作站等；配用CO-3010型柱恒温控制箱（天津美瑞泰克科技有限公司生产）；RE52CS型旋转蒸发仪（上海亚容生化仪器厂）。 　　1.3 方法 　　1.3.1 样品溶液的制备 酸枣仁样品粉碎后混和均匀，准确称取3.00 g样品，置于索氏提取器中，加入100 mL甲醇，100 ℃加热回流14 h后，挥干甲醇，残渣用30 mL水溶解，定量转移至60 mL分液漏斗中，加入石油醚萃取3次，每次15 mL，静置5 min，收集水层，加入水饱和正丁醇萃取4次，每次10 mL，静置15 min，收集正丁醇层，加入正丁醇饱和氨水溶液，萃取3次，每次10 mL，静置15 min，再收集正丁醇层，减压蒸发正丁醇，残渣用甲醇溶解，并定容至5 mL，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，备用。 　　1.3.2 对照品溶液的制备 分别称取对照品酸枣仁皂苷A 2.18 mg及B 2.11 mg，用甲醇溶解并定容至5 mL，摇匀即得对照品母液A和B。分别吸取一定体积，用甲醇稀释，配制成10，20，50，100，200， 500，1 000 μg/mL的对照品工作溶液。 　　1.3.3 色谱分析条件 色谱柱为Kromasil C18（5 μm，200 mm×4.6 mm），流动相为乙腈∶水=39∶61（V/V），检测波长204 nm，流速0.8 mL/min，柱温35 ℃，进样量10 μL。 　　2 结果与分析 　　2.1 标准工作曲线的绘制 　　吸取酸枣仁皂苷A和B的各对照品工作液20 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积（mAU·s）为纵坐标，以浓度（μg/mL）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：酸枣仁皂苷A为y=1.649 1x+15.258 6，r=0.999 9；酸枣仁皂苷B为y=2.158 3x+11.728 0，r=0.999 9。酸枣仁皂苷A和B均在10 ～1 000 μg/mL范围内呈良好的线性关系。 　　2.2 精密度试验 　　吸取对照品工作溶液A和B各10 μL，按上述色谱条件连续进样5次，测定峰面积，计算酸枣仁皂苷A及B的RSD分别为1.57%和1.72%。 　　2.3 重复性试验 　　取同一批样品，称取3份，按上述方法处理并测定，酸枣仁皂苷A及B的RSD分别为1.8%和2.2%。 　　2.4 样品测定 　　精确称取酸枣仁各3 g，按“1.3.1”制备供试品溶液，在上述色谱条件下，进行测定，色谱图见图1，酸枣仁皂苷A及B的含量见表1。 　　3 讨论 　　由表1可知，不同品种的酸枣仁中的皂苷A及B含量差异较大，一般酸枣仁皂苷A的含量均大于酸枣仁皂苷B的含量，32个品种的酸枣仁皂苷的测定结果表明，8号的酸枣仁皂苷A含量最高，14号的酸枣仁皂苷A含量最低，26号酸枣仁皂苷B含