蛋白质与酶学教学蛋白质与酶学.ppt

(a)牛血清白蛋白的近紫外吸收光谱 (b)细胞色素P450近紫外和可见吸收光谱 (c)绿豆胰蛋白酶抑制剂的近紫外吸收光谱 盐溶—盐析 等电点沉淀的蛋白质溶液中加入NaCl后沉淀溶解—盐溶 原因？ 盐析 向蛋白质溶液中加入大量硫酸铵后蛋白质会沉淀析出 原因？ 实验室液液萃取过程 分子质量最大的蛋白质分子不能进入载体的 孔隙中，在层析时被最先洗脱，此后是不同 分子质量的蛋白质，由大至小被依次洗脱。 同样分子质量的分子，则是线状分子在前， 球状分子在后。 Kd=(Ve— Vi)/( V0—Vi) 与标准样品的分子质量的对数成线性关系. 一般情况是高盐浓度下，使疏水物质吸附， 降低盐浓度，其至用水使在疏水柱上附着的 样品解离。除了盐浓度外，pH、温度和去垢 剂更也能对疏水层析起作用。 疏水层析在膜蛋白的研究中，还有另一个优 点。因为通常的膜蛋白在与某些特定的去垢 剂相结合后更为稳定，有时它们的活性还依 赖与某种去垢剂的存在，因此，利用疏水层 析可以帮助膜蛋白转换结合的去垢剂。 它们在凝胶中泳动的速度与蛋白质本身的电 荷无关，而是取决与蛋白质的分子量。因 此，SDS—PAGE不仅可用于蛋白质样品的分离 和鉴定，而且也被广泛地用于蛋白质分子量 的估测。 染料树脂是一种不专一的亲和介质，其特点 只可与很多物质非常稳定地结合。它可与许 多类型的酶结合，但又不被酶所作用，而且 价格低廉，但其作用