第八章 蛋白质和氨基酸的测定 （p114）第一节 概述1732.ppt

（二）试剂： 羧肽酶Y；牛胰核糖核酸酶A；降解缓冲液。 （三）操作步骤： 1、酶液和样品溶液的制备： 2、样品酶解： 3、氨基酸分析： 取上清液用自动氨基酸分析仪进行氨基酸定性或定量分析。 * vjghkjh （四）实验结果： 1、动力曲线绘制： 依据自动氨基酸分析仪测定所提供的数据，以酶解时间为横坐标，对不同时间所释放的各种氨基酸相应的量（mol/L）为纵坐标作图，绘制出氨基酸释放的动力学曲线图。 2、C－末端分析结果： 根据上述氨基酸释放的动力学曲线分析，判断和确定被测定蛋白质的C-末端为何种氨基酸，并写出其C－末端氨基酸排列顺序。 * vjghkjh 第五节 氨基酸的定性测定 一、氨基酸的一般显色反应 （一）茚三酮法： 常用法：将点有样品的层析或电泳完毕的滤纸充分除尽溶剂，用5g/L茚三酮无水丙酮溶液喷雾，充分吹干，置65℃烘箱中约30min（温度不宜过高，避免空气中氮，以免背泛红色），氨基酸斑点呈紫红色。 * vjghkjh （二）吲哚醌法： 1、原理： 各种氨基酸与吲哚醌试剂能显示不同颜色，因此可借此辨认氨基酸。氨对吲哚鲲显色没有妨碍，但其灵敏度较茚三酮法稍差，显色不稳定，颜色只有在绝对干燥的环境中才能保存。 2、试剂： 显色剂；底色退色剂。 3