第三十四章dna的复制和修复幻灯片.pptVIP

遗传信息传递的 中心法则 DNA的半保留复制的概念 在1958年由M. Meselson 和 F. Stahl 所完成的实验证明。将大肠杆菌在含15N的培养基中培养约十五代，使其DNA中的碱基氮均转变为15N。将大肠杆菌移至只含14N的培养基中同步培养一代、二代、三代。分别提取DNA，作密度梯度离心，可得到下列结果： DNA的半保留复制实验依据 DNA在复制时，需在特定的位点起始，这是一些具有特定核苷酸排列顺序的片段，即复制起始点。在原核生物中，复制起始点通常为一个，而在真核生物中则为多个。 DNA聚合酶催化的链延长反应 DNA聚合酶的3?- 5? 外切酶水解位点 pol Ⅰ为单一肽链的大分子蛋白质,可被特异的蛋白酶水解为两个片段，其中的大片段称为Klenow fragment，具有5→3聚合酶活性和3→5外切酶的活性。 DNA聚合酶Ⅲ全酶 3、DNA连接酶 DNA连接酶(DNA ligase)可催化两段DNA片段之间磷酸二酯键的形成，而使两段DNA连接起来。 DNA连接酶催化的条件： ① 需一段DNA片段具有3‘-OH，而另一段DNA片段具有5’-Pi基 ② 未封闭的缺口位于双链DNA中，即其中有一条链是完整的 ③ 需要消耗能量，在原核生物中由NAD+供能，在真核生物中由ATP供能。 连接酶连接切口 六、DNA生物合成过程 （一）、复制的起始 DNA复制的起始阶段，由下列两步构成。 1、预引发： （1）．解旋解链，形成复制叉： 由拓扑异构酶和解链酶作用，使DNA的超螺旋及双螺旋结构解开，碱基间氢键断裂，形成两条单链DNA。单链DNA结合蛋白（SSB）结合在两条单链DNA上，形成复制叉。 DNA复制时，局部双螺旋解开形成两条单链，这种叉状结构称为复制叉。 解螺旋酶 解螺旋酶（unwinding enzyme） ，又称解链酶或rep蛋白，是用于解开DNA双链的酶蛋白，每解开一对碱基，需消耗两分子ATP。目前发现存在至少存在两种解螺旋酶。 单链DNA结合蛋白 单链结合蛋白（single strand binding protein, SSB）又称螺旋反稳蛋白（HDP）。这是一些能够与单链DNA结合的蛋白质因子。其作用为：① 使解开双螺旋后的DNA单链能够稳定存在,，便于以其为模板复制子代DNA； ② 保护单链DNA，避免核酸酶的降解。 （2）．引发体组装： 由蛋白因子（如dnaB等）识别复制起始点，并与其他蛋白因子以及引物酶一起组装形成引发体。 *引 发 体 引发体(primosome)由引发前体与引物酶（primase）组装而成。 引发前体是由若干蛋白因子聚合而成的复合体。在原核生物中，引发前体至少由六种蛋白因子构成。蛋白i、蛋白n、蛋白n”、蛋白dnaC与引物预合成有关，蛋白n’与蛋白dnaB与识别复制起始点有关，并具有ATPase活性。 引物酶本质上是一种依赖DNA的RNA聚合酶（DDRP），该酶以DNA为模板，聚合一段RNA短链引物(primer)，以提供自由的3-OH，使子代DNA链能够开始聚合。 大肠杆菌复制起点成串排列的重复序列 2、引发： 在引物酶的催化下，以DNA为模板，合成一段短的RNA片段，从而获得3端自由羟基（3-OH）。 RNA引物 参与DNA复制的DNA聚合酶，必须以一段具有3’端自由羟基（3’-OH）的RNA作为引物(primer) ，才能开始聚合子代DNA链。 RNA引物的大小，在原核生物中通常为50～100个核苷酸，而在真核生物中约为10个核苷酸。RNA引物的碱基顺序，与其模板DNA的碱基顺序相配对。 （二）、复制的延长 1、聚合子代DNA： 由DNA聚合酶催化，以3→5方向的亲代DNA链为模板，从5→3方向聚合子代DNA链。在原核生物中，参与DNA复制延长的是DNA聚合酶Ⅲ；而在真核生物中，是DNA聚合酶α(延长随从链)和δ（延长领头链）。 2、引发体移动： 引发体向前移动，解开新的局部双螺旋，形成新的复制叉，随从链重新合成RNA引物，继续进行链的延长。 以3→5方向的亲代DNA链作模板的子代链在复制时基本上是连续进行的，其子代链的聚合方向为5→3，这一条链被称为领头链(leading strand)。而以5→3方向的亲代DNA链为模板的子代链在复制时则是不连续的，其链的聚合方向也是5→3，这条链被称为随从链(lagging strand)。 由于亲代DNA双链在复制时是逐步解开的，因此，随从链的合成也是一段一段的。DNA在复制时，由随从链所形成的一些子代DNA短链称为冈崎片段(Okaz