流感、人流感标本的采、运输和保存.ppt

流感病毒标本的采集、运输、保存 黔东南州疾控中心 刘 静 概 述 流感病毒分离成功与否很大程度上取决于临床标本的质量，及其保存运输等环节 多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物及尸检组织 一、采样对象和时间 采样对象：流感样病例（没有服用过抗病毒药物 ）、人禽流感待查病例 流感样病例:发热（体温≥38℃），伴咳嗽或咽痛之一者，而缺乏其它的实验室确定诊断依据 采集时间：病人发病后的头三天 二、采样液要求 常用的采样液有：普通肉汤（只用于鸡胚，对细胞有毒性），PH 7.4-7.6的Hank’s液，Eagel`s培养液或水解乳蛋白溶液 采样液应包含有一定量的蛋白质和抗菌素 标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存 三、临床标本的采集 常用的标本种类： 咽拭子 鼻拭子 漱口液 鼻咽吸取物 鼻洗液 血清 1、咽拭子 用灭菌棉签（最好用塑料柄、尼龙拭子）擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去 2、鼻拭子 将灭过菌干净的棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出，以同一拭子擦拭两侧鼻孔。将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去 3、鼻咽吸取物 用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液。先将收集器头部插入鼻腔，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的粘液，并用采样液5ml涮洗收集器3次 4、鼻洗液 患者取坐姿，头微后仰，用移液管将5 ml生理盐水注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。然后让患者低头使生理盐水流出，用平皿或烧杯收集洗液。重复此过程洗两侧鼻孔 6、血清 抽取5ml静脉血到有旋转盖的带垫圈的螺口塑料管中，尽量采集双份血清。 全血离心1000g，10分钟 ;冷藏放置，直到血细胞块从血清中完全析出。在无菌条件下将血清移至灭菌血清管中，-20℃保存。 四、标本收集注意事项 操作要细心，严防标本间交叉污染，要做好自我保护 采集标本要有一定力度 标本采集后应迅速至于冰上或者4 ℃以下保存，因为流感病毒对热很敏感 标本管上写明：医院名称、标本号、患者姓名、性别、采样日期 标本采集后尽量在24小时内送到实验室进行病毒分离。24小时内未能进行病毒分离的标本应放-70 ℃或以下 五、临床标本的运送要求 新鲜的临床采集标本 应在4℃条件下，24小时内运送至全国流感监测网络实验室（州疾控中心）；未能24小时内送至实验室的，应置-70℃或以下保存 冻存的临床采集标本 应在冻存的条件下，低温送至实验室 六、临床标本的处理和保存 新鲜的标本送至实验室后，病毒分离标本应尽快进行接种分离，24小时内能进行接种的可置于4℃保存，如未能接种应置-70℃或以下保存 冻存的标本送到实验室后，24小时内能进行病毒分离的，可以放置4℃保存。如未能分离的标本应置-70℃或以下保存 临床标本处理后，将原始标本分为三份:一份（40％）用于鸡胚接种，一份（30％）用于MDCK细胞接种，一份（30％）保存待复核用。对于病毒分离阳性的标本－70℃保存6个月 七、流感病毒株的运输 病毒标本必须放在大小适合的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料管里，拧紧。盖上盖子后不应有泄漏，推荐使用螺口细胞保存管保存和运输流感病毒标本 直接在塑料管上用油性记号笔写明病毒的名称，同时也将病毒标本有关信息填在“流感/人禽流感毒株送检单”内，送检单应单独放在防水的袋子里 将装标本的密封袋放入专用运输箱内（或疫苗冷藏包），放入冰排，然后以柔软物质填充，内衬具吸水和缓冲能力的材料 八、甲型H1N1、人禽流感标本采集的生物安全防护 1．采集甲型H1N1、人禽流感临床样本时，采集人员需要做好个人防护，戴防护口罩、帽子、护目镜、手套、防护衣、鞋套。 2.甲型H1N1、人禽流感标本的运送、接收和保藏应当符合我国《病原微生物实验室生物安全管理条例》（国务院424号令）的有关要求。 3．甲型H1N1、人禽流感临床标本的处理、分装在生物安全二级的实验室里进行，采用生物安全三级防护。 4．甲型H1N1、人禽流感病毒分离、培养、纯化，微量中和试验等实验必须在生物安全三级（BSL-3级）实验室里操作。 5．临床标本病毒核酸提取在生物安全二级（BSL-2级）实验室的二级生物安全柜里进行，采用生物安全三级防护。 6．用灭活的抗原进行红细胞凝集抑制（HI）实验、RT-PCR病毒核酸检测可以在生物安全二级（BSL-2级）实验室里操作。 * * 采鼻、咽拭子的器材和容器 * *