HPLC—ICP—MS法分析测定药用植物中形态汞.docVIP

HPLC—ICP—MS法分析测定药用植物中形态汞 　　摘 要 确定针对连翘、红花、番泻叶、西洋参、川穹、当归等药用植物中的汞形态（甲基汞、乙基汞、二价汞离子）超声提取样品前处理方法，采用phenomenex C18液相色谱柱进行分离，ICP-MS检测。样品回收率72.83%～98.25%，精密度（RSD）（n=6）均小于15%，甲基汞、乙基汞、二价汞的检出限分别为0.125mg/kg，0.250mg/kg，0.125 mg/kg。该方法具有灵敏度高、干扰小、样品前处理简单等优点，可用于药用植物中汞形态的筛查和测定。 　　关键词 高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱 汞形态分析 　　引 言 　　汞是一种毒性较大、熔点低、易挥发的重金属。自然界中以金属汞、无机汞和有机汞形态存在[1]。另外，汞是对人类和高等生物最具危害的元素之一， 有机汞化合物在农业中常用作杀虫剂和杀菌剂，无机汞和单质汞在生活中也普遍使用，且无机汞通过生物甲基化作用生成毒性更强的甲基汞， 从而被动植物吸收， 并通过食物链的富集作用进入人体， 其富集倍数可高达106～107[2]。鉴于不同形态汞化合物的毒性和差异，测定样品中不同形态汞含量和差异越来越重要[3]。汞的毒性取决于化学结构， 元素汞、无机汞和有机汞是汞暴露的3种形态，它们的中毒症状和暴露途径各不相同。汞中毒事件频有发生，其中日本水俣湾有机汞污染事件最为突出，该事件引起世界范围对甲基汞的关注，各国针对水生产品中甲基汞含量都有严格的限量标准[4]。随着对汞形态毒理性能研究的深入，世界各个发达国家如欧盟等国已经立法要求不仅要测定总汞含量，而且要区分不同形态汞含量，更加明确对汞的不同形态分析十分重要[5]。 　　无论是惯于使用植物药的中国、印度等东方国家，还是惯于使用西药的英国、美国等西方国家，都在加大对天然药物的研究和管理制度，各国药典收录的植物药也越来越多，用于质量控制的检测方法也日趋完善[6]。目前，我国检测分析汞形态的方法仍没有相应的国家标准和行业标准。本文目的在通过建立药用植物中汞形态的检测分析方法，使中药真正达到治病救人的目的和满足中药现代化和国际化的需求。 　　汞形态分析可以通过各种联用技术实现，如气相色谱（GC）、高效液相色谱（HPLC）、毛细管电泳（CE）等分离手段与原子吸收光谱（AAS）、原子发射光谱（AES）、原子荧光光谱（AFS）、电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）等具有元素选择性的检测手段相结合的分析方法[7，8]。本文应用液相色谱-串联电感耦合等离子发射质谱仪，用2%盐酸+0.5%硫脲提取液超声萃取的前处理方法，通过phenomenex C18分析柱，流速1.0mL/min对不同的汞形态进行分离，应用ICP-MS进行检测。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与试剂 　　甲基汞标准溶液（GBW08675）：86.2mg/kg（以甲基汞计）；乙基汞标准溶液（GBW（E）081524）：77.3mg/kg（以乙基汞计）；二价汞离子标准溶液：1000mg/kg（GBW08617）（以Hg计）中国计量科学研究院；连翘、红花、番泻叶、西洋参、川芎和当归（购置于北京的中药材市场）；L-半光氨酸盐酸盐（生化试剂）国药集团化学试剂有限公司；乙酸铵（分析纯）国药集团化学试剂有限公司；甲醇（色谱纯） 美国 ThermoFisher公司；盐酸（分析纯）国药集团化学试剂有限公司；硫脲（分析纯）北京化学试剂有限公司；氨水（分析纯）北京化学试剂有限公司。 　　1.2 仪器与设备 　　DRC-E型电感耦合等离子体质谱仪，美国 PE公司；Series 200型高效液相色谱仪，美国 PE公司；phenomenex C18柱（250×4.6mm，5 micron），美国 phenomenex公司；3K15型离心机，德国 SiGMA公司；50 mL BD离心管，美国；1.5mL进样瓶，美国，戴安公司；HZS-H型水浴振荡器，哈尔滨市东联电子技术开发有限公司；0.45?m水相滤膜，美国戴安公司；BT 224S型分析天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司。 　　1.3 方法 　　1.3.1 色谱条件 色谱柱：phenomenex C18柱（250×4.6 mm，5micron）；流动相：0.1 %半胱氨酸盐酸盐+5%甲醇+ 0.01mol/L乙酸铵溶液；流速：1.0mL/min；进样体积：50?L。 　　1.3.2 质谱条件 离子透镜电压：6V；雾化室气体流量：0.82L/min；RF功率：1100W；辅助气体流量：1.2L/min；等离子体气流量：16L/min。 　　1.3.3 样品前处理 每种中药材样品约500g，将其切碎后，用捣碎机将样品加工成粉末状。混匀，均分成2份作为试样，分装入洁净