第1章 遗传物质的分子结构性质和功能.pptVIP

概念一：正义链和反义链RNA组成的双链RNA可有效抑制靶基因的表达，这种现象称为RNA干扰。 概念二：RNA干扰是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。（来自于网络/view/206870.htm） 1.概念 第31页/共37页 2. RNA干扰作用原理 RNAi抑制基因表达方式： （1）与mRNA形成双链，阻止蛋白与靶mRNA的结合； （2）促使目标mRNA的降解。 第32页/共37页 3种不同的survivin siRNA对EJ28细胞增殖和凋亡的影响 第三军医大学学报 2007/22 目的观察靶向survivin的不同siRNA对EJ28细胞增殖和凋亡的影响。 方法通过化学合成方法合成3对siRNA和1对荧光标记的阴性对照siRNA。转染荧光标记的siRNA后,在荧光显微镜下观察转染效率。实验分为siRNA164、siRNA167、siRNA389、阴性对照组、脂质体对照组和细胞对照组。转染后24h、48h和72h,MTT法检测siRNA对EJ28细胞增殖的影响,流式细胞术检测凋亡率。 结果 靶向survivin的序列特异性siRNA均能抑制EJ28细胞的增殖,其中以siRNA164抑制细胞的增殖能力最强(P0.05),转染48h后的抑制率最高[(41.32±2.54)%];转染48h后,siRNA164组凋亡率最高[(13.20±0.25)%]。 结论 靶向survivin的RNAi技术在膀胱癌的基因治疗中可能具有一定的价值 文献选读 第33页/共37页 3. microRNA或miRNA，小RNA MicroRNAs (miRNAs)是一种大小约21—23个碱基的单链小分子RNA，是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成。 最早被发现的两个miRNAs——lin-4 and let-7被认为是通过不完全互补结合到目标靶mRNA 3’非编码区端，以一种未知方式诱发蛋白质翻译抑制，进而抑制蛋白质合成。 多个果蝇miRNA也被发现和他们的目标靶mRNAs的3’非编码区有部分同源。由于miRNA和其潜在的目标靶之间并非完全互补，这使得通过信息学的方法鉴定miRNA的目标靶位点变得困难。 MiRNA的作用目标靶和活性机制一直是各地的研究人员的关注热点。 第34页/共37页 MicroRNA-21 targets tumor suppressor genes in invasion and metastasis. Cell Research (2008) 18:350-359. MicroRNAs (miRNAs) are a class of naturally occurring small non-coding RNAs that target protein-coding mRNAs by repressing translation or causing mRNA degradation. Mature miRNAs comprise about 22 nucleotides, derived from long transcripts pri-miRNAs and pre-miRNAs. Although miRNAs operate in a similar fashion as short interfering RNAs (siRNAs) they typically target a cluster of genes instead of one specific gene. It is predicted that an average miRNA can have more than 100 targets]. Emerging evidence demonstrates an important role of miRNAs in regulating diverse cellular processes including differentiation, proliferation and apoptosis. 第35页/共37页 Deregulation of miRNAs affects normal cell growth and development, leading to a variety of disorders including human malignancies. Of particular interest, the overall miRNA expre