第九章-基因治疗(一).ppt

第九章 基因治疗(gene therapy) 基因治疗是通过一定的方式，将野生型基因或有 治疗作用的DNA序列导入人体靶细胞来纠正或改 善人类的遗传缺陷。 早期基因治疗的概念比较局限，仅指遗传缺陷基 因的修复，主要用于单基因遗传病的治疗。 现在基因治疗的概念：凡是采用分子生物学的方 法和原理，在核酸水平上开展的疾病治疗方法都 可称为基因治疗。如对癌症、多基因病、传染性 疾病、心血管疾病等的治疗。 1972年T.Friedmann 和R. Roblin在Science上发表了题为“基因治疗人类的遗传病（Gene therapy for human geneticdisease）”的文章。 但鉴于体外重组技术刚刚问世，人们对“基因治疗”尚感到远不可及，因而未得到学术界的认可。 直到1989年美国NIH的R.M.Blase和W.F.Anderson提 出的“基因治疗重症联合免疫缺损（SCID）”临床方 案得到批准，并于1990年，他们用腺苷酸脱氨酶 (ADA)基因治疗了一例ADA基因缺陷导致SCID的4岁 女孩Evans，这是世界上第一例基因治疗临床试验， 2年后Evans血液内T细胞的数量接近正常水平，且 ADA基因表达良好，随之世界各国都掀起了研究基 因治疗的热潮，很多遗传病患者都满怀信心地接受 基因治疗。R.M.Blase和W.F.Anderson也被公认为是 基因治疗的先驱。 不幸的是1999年美国发生了格尔辛基（J. Gelsinger） 基因治疗副反应事件，美国当即下令暂停所有基因治 疗的临床试验。无独有偶，法国也发生了导致患者死 亡的“泡泡男孩（bubble boy） ”事件，法国政府也立 即终止了该项试验。使基因治疗骤然陷入了困境。 经过多年的沉寂后，随着分子生物学的飞速发展， 细胞重编程等很多新技术的建立，特别是 2007年日 本的山中伸弥等成功地将皮肤细胞诱导成多能干细胞 后，又点燃了人们对基因治疗所寄予的新期盼 第一节．基因治疗的策略 一．体细胞基因治疗的策略 基因治疗可分为两大类: 生殖细胞基因治疗(germ cell gene therapy) 体细胞基因治疗(somatic cell gene therapy)生殖 细胞基因治疗是将目的基因转入生殖细胞系中。不 仅纠正患者的遗传缺陷，而且患者的生殖细胞也带 有被校正的基因型。对于小鼠等动物，是可以通过 转基因进行生殖细胞系的治疗。 体细胞基因治疗这种方法试图通过载体，将目的基 因转入某些患者的体细胞中来纠正异常表型。 目前，目的基因不可能转入身体所有的体细胞内。 遗传病是由于致病基因在一些特定组织中表达的结 果。 通过从有缺陷基因型的患者体中取出某些细胞，将 克隆的野生型基因导入到这些细胞中，再将转基因 的细胞转入患者体内，为患者提供正常的基因功能。 体细胞基因治疗的策略： （1）原位基因修复（in situ gene correction）：将致病基因 的突变位点加以矫正，使致症状得到完全恢复。 （2）基因置换(gene replacement) ：用外源野生型基因原位 替换病变细胞内的致病基因，来纠正突变基因的功能， 使细胞内的DNA完全恢复正常状态。 （3）基因激活(gene activation) ：有些正常基因不能表达并 非发生了基因突变，而是由于被错误地甲基化或编码区 组蛋白去乙酰化所致；也有的是编码区正常，但调控区 发生了突变，如启动子的突变使基因也无法表达。前者 可以通过去甲基化或乙酰化使基因恢复活性；后者可以 加入正常启动子来激活基因。 (4) 基因增效(gene augmentation)：将目的基因导入病变 细胞或其它细胞，目的基因的表达产物能修饰缺陷细胞的功能或使原有的某些功能得以加强。 (5) 基因干扰 ：也称基因失活，有两种干扰方法： ① 抑制有害基因：导入抑癌基因（TSG)来抑制癌基因的异常表达，但不能恢复癌基因的正常功能； ② 封闭有害基因：用反义RNA或小分子抑制RNA(siRNA) 来封闭癌基因基因，同样不能恢复癌基因的正常功能，但 可用来抑制病原体的关键基因。 (6) 免疫调节：将抗体、抗原或细胞因子的基因导入患者体内，改变患者免疫状态，达到预防和治疗疾病的目的。 (7) 药物敏感疗法：应用药物敏感基因转染肿瘤细胞，以提高其对药物的敏感性。 二、基因治疗的关键步骤基因治疗的关键包括以下三个方面： ①目的基因的选择； ②靶细胞的选择； ③选择安全而高效的方法和载体系统； 用于基因治疗的基因需满足以下几点; ①在体内仅有少量的表达就可显著改善症状；