第8章 2节基因治疗3,lmj.pptVIP

1999年9月17日，美国宾夕法尼亚大学的威尔森，在对严重联合免疫缺陷病患者进行基因治疗临床试验当中，患者出现了严重的免疫反应，导致了有遗传性肝病的患者杰西?格尔辛基(Jesse Gelsinger)死亡。 (一)基因治疗存在的问题 八、基因治疗存在的问题与展望 * * 杰西患有先天性鸟氨酸甲酰氨基转移酶缺乏症（X连锁性遗传病），在接受了以腺病毒为载体的基因治疗后数小时，体温迅速升高，最终由于多器官衰竭而去世。 为此美国FDA 给予主研人员威尔森以严厉惩罚：取消其从事任何临床试验的资格；威尔森所在的美国宾夕法尼亚大学当时进行的所有基因治疗临床试验均被停止。 事后调查发现病毒触发了强烈的免疫反应，引起肝脏、肺和肾脏的血管壁发生炎性反应。此外，这一事件的发生也与研究者忽视规则有密切关系。 * * 2002年法国 8名 SCID-X1 患者受试者的病情从基因转导治疗中获得改善，但其中 4名患者最终患上了 T细胞性白血病。有 3例是由于研究人员将病毒载体整合入 LMO2基因或该基因的邻近片段意外激活原癌基因LMO2导致的。 * * 伦敦大学儿童健康研究所对X1型重症联合免疫缺陷受试者进行逆转录病毒转导的自体造血干细胞治疗，10名受试者中1位患上T细胞性白血病。 英国的相关研究者在进行该项试验时，希望借助更换了的载体以及改变进行干细胞转导时的环境，从而避免白血病的发生，但是，结果证明，这些举措并没有达到预期效果。 * * 2007年7月，美国马里兰州一位 36岁患有类风湿性关节炎的妇女 Jolee Mohr，在一项采用腺相关病毒的基因疗法临床实验中死亡，引发了美国全国上下对所有采用腺相关病毒所进行的临床实验的安全性重新审查。 在该研究中，研究者将表达 TNFα拮抗因子的II型腺相关病毒载体注射到局部性关节炎的患者关节处。 Jolee Mohr在接受了第二次病毒载体的注射后，出现严重发热，并于三周后死亡。 * * (二)展望 倪坤?索米亚（Nikunj Somia）和因德尔?M?韦玛（Inder M.Verma）在Nature Review Genetics上发表的一篇文章写到的那样： 过去数十年间，我们见证了基因治疗的成长。它给我们带来了数不清的希望与挫折。基因治疗的潜力还远在我们视线所及之外。 我们需要遗传学家鉴定出更多有针对性的治疗基因； 需要病毒学家构建出更加安全有效的病毒载体； 需要分子生物学家设计出更具细胞靶向性的基因导入方案； 需要免疫学家避免那些不期而至的过度免疫反应； 需要细胞生物学家让基因能更方便的进入各种机体组织； 需要临床医生们运用这些研究成果谨慎的进行临床试验。 * * * * * * * * ITR ITR 早期转录域基因：E1a、E1b、E2、E4编码病毒DNA 复制所必需的调节蛋白；E3介导宿主对腺病毒感染的反应；各自有单独的启动子控制。 晚期转录域基因：L1、L2、L3、L4、L5和IVa2 编码病毒结构蛋白；由单一主要晚期启动子控制。 两端短末端反向重复序列ITR ：含有病复制和包装所必需的顺式调控元件。 腺病毒基因组结构示意图： * * IVa2 L1~L5 E1a~E4 腺病毒载体 辅助病毒 特点 第一代 缺失E1A基因和部分E1B、E3基因，代之以目标基因。 E1A、E1B基因的功能由包装细胞(293细胞)的辅助病毒提供； 基因转移和表达的效率很高，但易引起免疫反应。 第二代 缺失E1A基因和部分E1B、E3基因，代之以目标基因。 E2A基因突变或缺失，或引入一个温度敏感的突变。 免疫原性较低。 第三代 去除Ad5的E1和E4基因。 肝毒性低，无病毒复制的危险，基因表达持续时间长。 “无内脏”腺病毒载体 缺失腺病毒的所有编码区段，仅含末端反向重复序列(ITR)、病毒包装信号Ψ和目标基因。 免疫原性低。 腺病毒载体比较 * * 2.感染宿主细胞范围较广，既能感染分裂相细胞，也能感染非分裂相细胞； 5.腺病毒载无包膜，不易被补体灭活，可直接体内应用； 3.可获得高达 109~1011CFU/ml的高滴度的病毒颗粒； 优点： * * 1.基因导入效率高，对人类安全； 4.重组腺病毒可通过口服经肠道吸收、或喷雾吸入或气管内滴注 2.宿主的免疫反应导致腺病毒载体表达短暂。 3.有两个环节可能产生复制型腺病毒。 4.基因组较大，构建载体较复杂；靶向较性差。 1.不能整合到靶细胞的基因组DNA 中。分裂