HPLC法测定舒心糖浆中阿魏酸含量.docVIP

HPLC法测定舒心糖浆中阿魏酸含量 　　摘 要：目的：采用高效液相色谱法测定舒心糖浆中阿魏酸的含量。方法：采用美国Waters公司C18 色谱柱（3.9mm×150mm，5μm）；甲醇-冰醋酸-水（30：0.01：70）为流动相；检测波长为321nm。结果：阿魏酸在40～320μg?mL-1范围内呈良好的线性关系，平均回收率为99.3%。结论：所建立的方法分离效果好，灵敏、准确、简便，适宜舒心糖浆中阿魏酸的测定。 　　关键词：舒心糖浆；阿魏酸；高效液相色谱法 　　舒心糖浆方剂出自《伤寒论》，由党参、黄芪、红花、当归、川芎、三棱、蒲黄组成。舒心糖浆具有补益心气、活血化瘀、改善心功能的功效。舒心糖浆常用于冠心病、心绞痛、胸痛胸闷、气短、乏力等。当归别名为干归、马尾当归、秦哪、马尾归、当归身、涵归尾、土当归等。当归具有补血、活血、调经止痛、润燥滑肠等功效。当归常用于症瘕结聚、崩漏、虚寒腹痛、肌肤麻木、肠燥便难等症。川芎具有活血行气，祛风止痛的功效，常用于月经不调、产后瘀滞腥痛、胸胁疼痛、头痛眩晕、跌打损伤等。阿魏酸为川芎和当归的主要成分。阿魏酸化学名称为4-羟基-3-甲氧基肉桂酸，异名咖啡酸-3-甲基醚，3-O-甲基咖啡酸。阿魏酸主要检测法有薄层洗脱比色法、薄层显色扫描法、直接扫描法及高效液相法[1-8]。本文用高效液相法对舒心糖浆中的阿魏酸进行了含量测定。 　　1 仪器与试剂 　　SCQ-1000B数控加热超声波清洗机（上海声彦超声仪器有限公司）； WP-UP-Ⅲ-20精密型实验室专用超纯水机（四川沃特尔水处理设备有限公司 ）；CC-100分析型色谱柱温箱（成都纳杰科技有限公司）； LC-810液相色谱仪；（北京北分兴宇仪器有限公司）；320 XT 电子分析天平（ 上海精科天美贸易有限公司）。 　　2 实验方法与结果 　　2.1 液相色谱条件 　　依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下：色谱柱为美国Waters公司C18色谱柱（3.9mm×150mm，5μm）；甲醇-冰醋酸-水（30：0.01：70）为流动相；检测波长为321nm；流速1.0mL?min-1；柱温：30℃。理论板数按阿魏酸峰计算应不得低于2000。 　　2.2 提取方法确定 　　将药液通过大孔树脂，分别采用30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇洗脱，结果表明采用70%乙醇洗脱效果最好，所以选择70%乙醇洗脱。 　　2.3 供试品溶液的制备 　　将药液通过大孔树脂，采用10倍柱体积70%乙醇洗脱，减压回收乙醇，残渣用甲醇溶解并稀释至25毫升，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。 　　2.4 对照品溶液的制备 　　精密称取阿魏酸对照品约1mg，置50mL容量瓶中，用流动相超声波振荡溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL溶液中含阿魏酸20μg）。 　　2.5 阴性干扰试验 　　取蒲黄以布袋包好，同党参、黄芪、三梭加水煎煮二次，第一次 2小时，第二次煎煮 1.5小时后，再加入红花煎煮30分钟，合并滤液，滤过，滤液浓缩至适量，加入蔗糖650g和防腐剂适量，煮沸使溶解，滤过，加水至1000ml，搅匀，即得阴性制剂。将阴性制剂通过大孔树脂采用10倍柱体积70%乙醇洗脱，减压回收乙醇，残渣用甲醇溶解并稀释至25毫升，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，按色谱条件测定。结果表明：在选定条件下测得的阴性液吸收曲线在与阿魏酸相同保留时间处不存在吸收峰，说明此方法具有较强的专属性。 　　2.6 标准曲线的制备 　　制备浓度为40、80、160、200、240、280、320μg?mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积积分值A为纵坐标，进样浓度（μg?mL-1）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，阿魏酸对照品在40～320μg?mL-1范围内线性关系良好。 　　2.7 精密度试验 　　精密吸取阿魏酸对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.81%。结果表明，本实验精密度良好。 　　2.8 重现性试验 　　分别取同批次舒心糖浆样品6份，分别制备成供试品溶液，按色谱条件测定含量，并计算样品的RSD值。结果RSD值为0.52%，表明此含量测定方法的重现性良好。 　　2.9 稳定性试验 　　取供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10h精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进性测定，阿魏酸峰面积积分值的RSD为0.66%。结果表明供试品溶液中阿魏酸至少在10h内稳定。 　　2.10 回收率试验 　　采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分别精密添加一定量的阿魏酸对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品