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3M金黄色葡萄球菌快速测试片法 原理:该测试片由两部分组成,第一部分是金黄色葡萄球菌培养基片,此检测片含有改良的Baird - Parker 营养物及一冷水可溶的胶体,第二部分是热稳定核酸酶(Tnase) 反应片,包含有DNA ,甲苯胺蓝(toluidine blue - O) 及四唑指示剂(tetrazolium) ,此指示剂有助于菌落的计数及确定葡萄球菌热稳定核酸酶的存在。 最快可以6小时培养出菌落数 金葡菌肠毒素的检验 VIDAS（自动酶联免疫检测系统）：肠毒素的检测 毒素基因：如肠毒素A -E (entA, entB, entC, entD, entE)毒素基因等，常用的方法有PCR、荧光PCR等 质量控制 采用受控的检验方法 设立微生物培养基的质量控制程序 设立质控菌株 设立实验仪器的质量控制程序：如高压锅、培养箱、生物安全柜等 人员培训 谢谢大家 * 金黄色葡萄球菌检测 内 容 概述 流行病学 实验室检验 生物学特性 检验程序及检验方法 质量控制 概 述 金黄色葡萄球菌是国内外最常见的细菌性食物中毒病原菌之一。在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%；加拿大则占45%；我国由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒约占细菌性食物中毒事件的25%。金黄色葡萄球菌肠毒素已成为世界性卫生问题 流行病学 ---分布 在自然界中广泛存在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中均可找到 作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染的机会很多 流行病学 ---临床症状 化脓性炎症 局部化脓性炎症 全身感染（如败血症、脓毒血症等） 毒素性疾病 食物中毒(多表现为急性胃肠炎) 烫伤样皮肤综合症 中毒性休克综合症 假膜炎肠炎 流行病学 ---食物中毒 金葡菌引起的食物中毒：是金葡菌肠毒素所引起的疾病，可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心、呕吐最为突出而且普遍，腹痛、腹泻次之 当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经8-10小时即可相当数量的肠毒素 流行病学 ---食物中毒 中毒的季节分布：多见于春夏季 潜伏期：2-4小时 中毒相关食品种类：奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。 流行病学 ---食物中毒 传染源：是被金葡菌感染的人和动物化脓性 感染部位 传播途径：经食物传播 流行病学 ---肠毒素形成条件 存放温度，在37°C内，温度越高，产毒时间越短 存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素 食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定量淀粉的食物，肠毒素易生成 污染的控制防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成 在低温和通风良好的条件下贮藏食物，并且食用前要彻底加热 防止金黄色葡萄球菌对奶及其制品及食物的污染 肉制品加工厂所用的原材料经高温或其他适当方式处理后才能进行加工生产 定期对食品生产加工人员和餐饮服务人员进行健康检查 实验室检验 生物学特性---菌体形态及培养特征 革兰氏阳性球菌，直径为0.8-1.0微米，镜检时呈单个、成对、四联或不规则的葡萄串状 无芽孢，无鞭毛，无荚膜 需氧或兼性厌氧菌 可在10%-15%氯化钠和40%胆汁中生长 血平板上菌落周围形成透明的溶血环 生物学特性---菌体形态及培养特征 大多数菌株能生长在6.5-46℃之间；最适温度37℃。能在pH4.2-9.3之间生长最适为pH7.4 大多数菌株产生类胡罗卜素，使细胞团呈现出深橙色到浅黄色。该色素为脂溶性，局限于菌落内 生物学特性 ---生化反应 接触酶阳性 产生蛋白酶、脂肪酶、磷脂酶、脂酶和溶菌酶，大多数菌株可水解天然的动物蛋白，例如血红蛋白、纤维蛋白、卵白、酪朊和多肽类如明胶，水解脂类、吐温类和磷脂蛋白质，并释放脂肪酸； 所有的毒株产生凝固酶，人和动物来源的菌株通常可凝固兔、人、马和猪的血浆 金葡菌的毒素和酶 a.溶血素：外毒素，分α、β、γ、δ四种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死 　　b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞 　　c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中