中国医科大学 微生物学 第十七章 螺旋体.ppt

第十七章 螺 旋 体 螺旋体是弯曲呈螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物。结构与细菌相似，如有细胞壁、原始核，以二分裂方式繁殖，对抗生素敏感等。 其中致病性螺旋体主要有钩端螺旋体属、疏螺旋体属、密螺旋体属等3个属。 第一节 钩端螺旋体 是人畜共患病，鼠类和猪是储存宿主。在肾中存在，随尿排出，污染水和土壤，人类接触污染疫水。穿透皮肤粘膜侵入，并引起血症，产生如内毒素等物质，引起钩端螺旋体病，出现发热、头痛肌痛、眼结膜充血等中毒症状，患者有全身毛细血管损伤和微循环障碍，并引起肝肾功能损害。由于血清型、毒力数量不同以及免疫水平差异，有①流感伤寒型；②黄疽出血型；③肺出血型；④脑膜脑炎型；⑤肾功能衰竭型；⑥胃肠炎型等类型。 应用显微镜凝集试验和凝集素吸收试验，可 进行血清群和型的分类。问号状钩端螺旋体 可分为25个血清群、273 个血清型，其中我 国至少存在19个血清群、74个血清型。我国 目前使用的问号钩端螺旋体参考株有14群15 型。 微生物特性 螺旋细密和规则，一端弯曲使菌体呈问号状 故名钩端螺旋体。G-，但不易着色。常用 Fontana镀银染色法，被染成棕褐色。暗视 野显微镜下可见活泼运动、折光性强而成白 色的钩端螺旋体。 内鞭毛紧紧缠绕在原生质圆柱体表面呈螺旋 状，使钩端螺旋体活泼地沿长轴旋转运动。 培养特性 营养要求较高，常用含10％兔血清的Korthof培养基，兔血清除促进钩端螺旋体生长外，尚有中和代谢产物毒性的作用。最适生长温度为28℃～30℃，最适pH为7．2～7．6，人工培养基中生长缓慢。在液体培养基中，分裂一次需8～lOh，培养一周左右，呈现为半透明云雾状生长，但菌数仅相当于普通细菌的1／10—1／100。 抵抗力 对热抵抗力弱，60℃、1min即死亡。0．2％来苏、l：2000升汞、1％石炭酸经10～30min被杀灭。 对青霉素敏感。钩端螺旋体在夏秋季酸硷度中性的湿土或水中可存活20天以上，甚至数月之久，这在本菌的传播上有重要意义。 标本采集 钩端螺旋体可从临床标本、携带者和自然界的水中分离获得。 标本采集包括血液、尿和脑脊液，发病早期(1周内)血液的阳性率高，1周后尿和脑脊液等的阳性率高。感染6～10天取血可检出抗体，在病程第3或4周达最高水平，此后抗体水平逐渐下降，血清学诊断则需在病程早期及恢复期分别采集血清，作双份血清试验。 标本直接检查 1．取急性期病人血以4000r／min离心45— 60min，取1滴沉淀物置玻片上，加盖 玻片后作暗视野检查。也可用Fontana 镀银染色法染色后观察。 2．核酸检测 采用同位素或生物素、地高辛 标记的特异DNA探针法，检出标本中钩 端螺旋体的核酸，较培养法快速、敏感。 若先用PCB技术先行扩增，再用探针确 定，则敏感度更加提高。 分离培养 取钩端螺旋体血症期的病人血液2ml或发病后第2周的无菌弱碱性尿沉渣接种于Korthof培养基中，28℃孵育，因系需氧生长，故靠近培养液面呈半透明雾状混浊。 取培养物作暗视野检查，观察有无螺旋体生长。连续观察30d，如无生长方判为阴性 抗体检测 显微镜下凝集试验是常用的方法。 (1)抗原制备：取标准菌株4—7天的培养物，每 视野50～60条活钩端螺旋体。 (2)方法与结果：取病人血清以56℃，30min灭 活后稀释，每个稀释度0．1ml 血清中加入 等量活菌抗原，30℃2h后，取1滴覆盖玻片， 暗视野显微镜下若有抗体存在，则钩体凝集 成团，数减少，菌体溶解。 结果判定：50％以上菌体凝集或溶解为“2+” 为血清效价。达1：300以上才有诊断意义 或效价增高4倍以上，则可确诊本病。 酶联免疫吸附试验 用ELISA法和IgM斑点-ELISA法等间接检测钩体病人血清中特异性抗体，用于该病的快速诊断。 包被抗原用钩端螺旋体培养物经超声波破碎，15000r／min离心20min，用于包被的抗原浓度以20μg／ml为好。被检血清OD值为阴性对照的2倍，即为阳性。 动物试验 动物是分离钩端螺旋体的敏感方法，尤其适用于有杂菌污染的标本。 方法是将标本接种于幼龄豚鼠或金地鼠腹腔。接种3～5d后，可用暗视野显微镜检查腹腔液；亦可在接种后3～6d取心血检查并作分离培养。动物死后解剖，可见皮下、肺部等有大小不等的出血斑，肝、脾脏器中有大量钩端螺旋体存在。 第二节 疏螺旋体属 有3～10个稀疏而不规则的螺旋，运动活泼。 对人致病的主要有伯氏疏螺旋体、回归热螺旋体、奋森螺旋体等。 一、伯氏疏螺旋体 是莱姆病的主要病原体，1977年在美国莱姆镇