电针“三阴穴”对慢性非细菌性前列腺炎大鼠免疫功能影响.docVIP

电针“三阴穴”对慢性非细菌性前列腺炎大鼠免疫功能影响 　　摘要：目的 观察电针“三阴穴”对慢性非细菌性前列腺炎大鼠模型免疫功能的影响，并探讨其作用机制。方法 将48只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、药物组、电针组。皮内注射同种异体雄性SD大鼠前列腺蛋白提纯液，辅以双重免疫佐剂复制自身免疫性慢性非细菌性前列腺炎大鼠模型。造模后电针组、药物组分别给予电针“三阴穴”、舍尼通灌胃治疗15 d。观察各组动物前列腺组织湿重及指数、形态结构，用放免法检测前列腺组织中抗体IgG含量，局部组织细胞因子白细胞介素（IL）-2、IL-8的变化。结果 造模后模型组前列腺组织湿重及指数与空白组比较显著增高（P 　　关键词：慢性非细菌性前列腺炎；电针；“三阴穴”；免疫球蛋白；白细胞介素-2；白细胞介素-8 　　DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.09.015 　　中图分类号：R245 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）09-0044-03 　　慢性非细菌性前列腺炎（CAP）是临床男科的常见病、多发病，好发于20～40岁的青壮年，患病率达2.2%～9.7%[1]。CAP的病因目前尚不明确，关于发病机制的假说众多，其中自身免疫反应因素在其发病机制中的作用日益受到重视。近年来，国内报道显示针灸治疗CAP具有明显的优势[2]。本课题组在临床中总结出的“三阴穴”治疗本病具有特殊疗效，总有效率达85%[3]。本研究进一步通过动物实验探讨其作用机理，为临床应用提供依据。 　　1 实验材料 　　1.1 动物 　　雄性SD大鼠（SPF级）48只，3月龄，体质量（240±20）g，另取20只体质量为240～300 g的SD大鼠，用于取前列腺组织匀浆制作前列腺蛋白。均甘肃中医学院动物实验中心提供，合格证号：SCXK（甘）2004-0006。动物饲养在甘肃中医学院SPF级动物实验室，设施使用合格证号：SYXK（甘）2004-0006。 　　1.2 主要药物与试剂 　　福氏完全佐剂（美国Sigma公司提供，批号F-5506）；蛋白定量测试盒（双缩脲法），南京建成生物制品研究所提供，批舍尼通（普适泰），南京美瑞制药有限公司，批号白百破疫苗，甘肃省卫生防疫站；白细胞介素（IL）-2放免试剂盒，中国人民解放军兰州军区总医院安宁分院核检验科提供，批号IL-8放免试剂盒，中国人民解放军兰州军区总医院安宁分院核检验科提供，批号IgG放免试剂盒，中国原子能科学研究所提供，批号 　　1.3 主要仪器 　　Biofuge Fresco低温高速离心机，德国贺力氏（Heraeus）公司；Uv-2401 PC型紫外分光光度计，日本岛津（SHIMADZU）公司；MDF-71超低温冰箱，日本三洋（SANYO）公司；G6805型电针治疗仪，上海医疗器械高技术公司；华佗牌针灸针（0.32×15 mm），苏州医疗用品厂有限公司。 　　2 实验方法 　　2.1 分组 　　48只动物依体质量编号，按随机数字表法依次分为空白组、模型组、药物组、电针组，每组12只。 　　2.2 造模 　　CAP大鼠模型复制步骤参照文献[4]。①大鼠前列腺蛋白提纯液的制作：取240～300 g雄性大鼠10只，脱颈椎处死，在无菌条件下剥取前列腺组织，用冷生理盐水洗净，加入含0.5%Triton100的生理盐水溶液，在冰水浴上用玻璃匀浆器制成匀浆，10 000×g离心30 min，取上清液，用721分光光度计，以牛血清白蛋白溶液为标准蛋白溶液，采用双缩脲法进行蛋白含量测定，最后用0.1 mol/L、pH 7.2的PBS缓冲液稀释为15 mg/mL。②免疫注射：除空白组外，其他各组大鼠以乙醚麻醉，腹腔注射白百破疫苗0.5 mL，多点皮内注射大鼠前列腺蛋白提纯液和福氏完全佐剂（比例为1∶1的混悬液）1.0 mL，空白组分别行腹腔及皮内多点注射生理盐水注射液0.5、1.0 mL，各组均分别于第0、30日2次注射。 　　2.3 取穴 　　主要参照《实验针灸学》[5]中的大鼠腧穴定位法，并结合拟人法进行穴位定位[6]。夹阴1：平耻骨联合上缘，位于左侧腹股沟处；夹阴2：平耻骨联合上缘，位于右侧腹股沟处；重阴：在会阴穴与阴囊根部之间取穴。 　　2.4 处理方法 　　造模完成后第1日开始，电针组给予电针“三阴穴”处理。大鼠以仰卧位捆绑于鼠板上，以棉签蘸碘伏擦拭“三阴穴”，消毒局部皮肤，“夹阴1”、“夹阴2”，进针1 cm；“重阴”进针1.5 cm。接通电针仪，统一刺激标准为：“重阴”（左正，右正），“夹阴1”（左负），“夹阴2”（右负），疏密波，频率10 Hz，