β2微球蛋白全自动生化分析仪测定法.docVIP

β2微球蛋白全自动生化分析仪测定法 　　【摘要】目的：评价全自动生化分析仪测定β2微球蛋白（β2 MG）的方法。方法：采用日常病人混合血清为标本，进行线性测定、精密度测定、回收实验、干扰实验等方法学评价实验。结果：全自动生化分析仪测定β2?微球蛋白的线性范围为0 mg/L～16 mg/L，批内和批间的SD和CV均小于5%，均匀回收率为98.7%；胆红素含量在497 μmol/L内无干扰。结论：全自动生化分析仪进行β2?微球蛋白的测定，适用于临床。 　　【关键词】β2微球蛋白；混合血清；全自动生化分析仪；线性范围 　　【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2012）11-0338-01 　　β_2-微球蛋白（β2MG在多种系统疾病中都有不同程度的变化，今年来，因其与人类白细胞抗原有密切关系，而引起免疫学家的广泛重视 β2?微球蛋白（β2?MG）是一种分子量为11 800的低分子量蛋白，所有有核细胞都能产生。它存在于有核细胞的细胞膜上，是细胞中完整HLA分子的一部分。在正常生理条件下，体液中含量甚微。其主要生理作用为参与识别异己物质和提供杀伤细胞受体的作用。正常人体逐日产生100 mg―200 mg β2 MG，其血中浓度相当稳定，约为2 mg/L。测定体液中的β2 MG，对一些疾病的筛选、诊断、疗效观察和预后评价有一定的意义[1]。 　　本法采用β2?MG免疫透射比浊试剂盒在日立7600全自动生化分析仪开展β2?MG的测定，对这种方法进行了初步的评价，并进一步对实验的参数等进行了探讨。 　　1 材料与方法 　　1.1 标本 选取病人的日常检测血清标本，无溶血，无黄疸。 　　1.2 仪器 日本日立?7600全自动生化分析仪 　　1.3 （β_2MG药盒由中国原子能科学研究院提供，用放射免疫测定，FT3、FT4药盒由中国原子能科学研究院提供同位素研究所提供，严格按照说明书操作，质量控制符合科学要求。 　　1.4 统计方法：结果以均值标准差表示，组间比较采用两样本间t检验，相关性采用直线相关分析。 　　2 原理与方法 　　2.1 原理 β2?MG与包被在胶乳颗粒上的抗人β2?MG抗体结合产生浊度，其浊度与β2?MG浓度成正比，可用比浊法测定。 　　2.2 方法 上机测定参数：样品用量为3 μl，试剂Ⅰ用量为270 μl，试剂Ⅱ用量为30 μl，方法为两点终点法，主波长540 nm，副波长660 nm，反应为正反应，第一点读数18点，终点读数34点，温度为37 ℃。试剂盒提供的标准浓度为10 mg/L左右（以每盒所给标准浓度为准）。 　　3 实验与结果 　　3.1 线性测定 取β2?MG为20 mg/L左右的无溶血、无黄疸的新鲜血清做1∶（1～7）倍稀释，上机测定，结果见表1，图1。 　　表1 β2?MG浓度mg/L与吸光度差的关系（略） 　　图1 β2?MG线性图（略） 　　3.2 精密度测定 取无溶血、无黄疸混合血清分装20管，于-20 ℃保存备用。批内精密度，连续测定20次，结果：χ2=3.43 mg/L，SD=0.048，CV（%）=1.4%。批间精密度，连续测定20 d，结果：χ2=3.42 mg/L，SD=0.069，CV（%）=2.0%。 　　3.3 回收实验 取一混合血清（β2?MG含量为1.95 mg/L），分成三管每管0.45 ml，三管分别加进含量为10.6 mg/L、5.3 mg/L、2.65 mg/L的标准液0.05 ml测定，计算回收率分别为97.3%、99.0%、99.7%，均匀回收率98.7%。 　　3.4 干扰实验 取一无溶血、无黄疸混合血清（β2?MG含量为3.46 mg/L）0.5 ml，加进胆红素含量为497 μmol/L 的样品0.05 ml进行测定。测得β2?MG值为3.47 mg/L，可见胆红素含量在497 μmol/L下无明显干扰。 　　3.5 结果表明，在血清β2?MG含量为16 mg/L内线性良好，因此我们在实际测定中设置16 mg/L为测定上限，结果超过16 mg/L的样本，设定仪器自动稀释重做，以保证结果的正确性。 　　3.6 参考值 随机取正常体检血清70份，测定其β2?MG含量为：χ2=1.069 mg/L，SD=0.298，CV（%）=27.9%。 　　4 讨论 　　测定β2?MG的方法有免疫酶标法、放射免疫法、放射比浊法、免疫比浊法。免疫酶标法重复性差，适合大批量检测。放射免疫法和放射比浊法由于核素有半衰期，试剂有效期短；此外核素有放射污染、而且核素实验室的建设须经防疫部分的监视，操纵职员亦须经过特殊练习，不易普及，在测定时还需要昂贵的免疫测定仪。本法采用β2?MG免疫透射比浊试剂盒在日立?7600全自动生化分析仪上开展β2?MG的测