现代分子生物学-生物化学与分子生物学.PPT

* 生物系统中目标蛋白分子的定位、分离与纯化、分析与鉴定 蛋白质实验研究技术进展 生物系统中目标蛋白分子的定位、分离与纯化、分析与鉴定 蛋白质实验研究技术进展 生物系统中目标蛋白分子的定位 三个关键问题: 目标蛋白分子病理条件下的位置变化 避免假阳性 提高检测灵敏度 相关技术： 免疫细胞化学技术 放射自显影技术 X-射线显微摄影术 普通光学显微镜技术 透射电子显微镜技术 扫描电子显微镜技术 荧光显微镜技术 共焦激光扫描显微镜技术 免疫细胞化学技术 直接法（direct method） 间接法（indirect method） 荧光素 (fluorescein, FITC, TRITC) 辣根过氧物酶 (horseradish peroxidase, HP) 磷酸酶 (phosphatase) Antigen Antibody First antibody Second antibody-2 Second antibody-1 过氧化物酶-抗过氧化物酶复合物法, PAP （peroxidase-antiperoxidase complex method, PAP） First antibody Second antibody Antigen Horseradish peroxidae antibody Horseradish peroxidae 标记亲和素-生物素法（Labelled Avidin-Biotin method, LAB） direct method indirect method Antibody Second antibody Antigen Horseradish peroxidae First antibody Antigen Avidin Horseradish peroxidae Biotin Biotin Avidin 桥连亲和素-生物素法, BAB bridged avidin-biotin method 亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法, ABC avidin-biotin -peroxidase complex method First antibody Antigen Avidin HP Biotin First antibody Antigen Avidin HP Biotin Second antibody Second antibody 放射自显影技术(autoradiography, ARG) 制备放射性同位素标记探针 把放射性探针注入动物体内或加入生长在玻片上的细胞的培养液中 一定时间后，杀死动物取材制成切片或从培养液中取出玻片 在黑匣中, 切片或玻片与X-光片或涂有核乳胶的感光干板相贴感光 显影、定影处理 放射性同位素信号定位图像 目标分子定位情况 X-射线显微摄影术（ X-ray microphotography） 利用不同元素的原子对X射线吸收程度的差异，对组织标本内的某种特殊元素成分进行定性定位或半定量定位分析。 Red Orange Yellow Green Cyan Blue Violet Thermal radiation Emission light Fluorescence Excitation light Ultraviolet （250~400nm） Generation of fluorescence 1 2 3 Cell survival 610 460 Fluorescein diaceticate (二乙酸荧光素) Cell/Bacteria 400~500 360 Primulin (樱草素) Cell/Bacteria Cell/Bacteria Cell/Bacteria Cell/Bacteria Usage 435 405 360 380 Excitation light, nm Emission light, nm Name 420~550 Thioflavine (硫代黄素) 490~590 Auramine (金胺, 槐黄) 480 Fluorescein (荧光素) 450 Coumarin (香豆素) Fluorescent dye Mitochondrion 540~660 560 Rhodamine 123 (罗丹明 123) Golgi complex Endoplasmic reticulum Lysosome Lysosome Mitochondrion Usage 464 459 541 346 490 Excitation light, nm Emission light, nm Name 527(low concentration or low poten) /590(high conc