论文答辩-小鼠Beta-防御素抗宫颈癌作用及其机制的研究.pptVIP

研 究 背 景 抗肿瘤机制 结　　论  结　论 实验流程图 实验动物分组 结　　论 结　　论 结　果（一） SiHa/M　 SiHa/R SiHa/K 结　果（二） SiHa/M组　 SiHa/R组 SiHa/K组 SiHa组 图2-7 细胞培养上清Western Blot分析 Fig.2-7 Analyses of the supermantant by Western Blot 结　果（三） * * 图2-8 稳定转染细胞活力分析 Fig.2-8 Analysis of viability of cells tranfected stablely * * * P ＜0.05，compared with SiHa/K and SiHa at the same time 结　果（四） 结　果（五） SiHa组 SiHa/R组 SiHa/M组 AnnexinⅤ联合PI检测结果 SiHa组 SiHa/R组 SiHa/M组 DAPI DAPI DAPI FITC FITC FITC OVERLAP OVERLAP OVERLAP 讨 论（一） 表达载体的选择－SiHa细胞 　具有蛋白修饰功能 　无限传代能力 　能够持续表达外源基因 讨 论（二） 防御素成熟机制 原防御素 成熟防御素 前原防御素 由93～95个氨基酸组成，包括信号肽、前体片段、成熟肽 N端两次裂解，各除去19个氨基酸，得到含56个氨基酸的原防御素 溶酶体内再一次裂解，形成包含29～35个氨基酸的成熟防御素 讨 论（三） 细胞活性鉴定 细胞活力检测 细胞凋亡检测 　 3 1 获得稳定转染细胞株SiHa/M、SiHa/R Title 采用三种方法证实mBD2基因及其蛋白稳定表达 Title 实验证实mBD2对宫颈癌细胞有抑制作用 第三部分 mBD2抗裸鼠宫 颈癌移植瘤的实验研究 肿瘤生长曲线、病理改变、免疫组化、凋亡 裸鼠皮下移植瘤 SiHa/M细胞 SiHa/R细胞 SiHa/K细胞 SiHa细胞 1 SiHa/M组 裸鼠接种稳定转染　　 细胞转染质粒为pcDNA3.1(+)/mBD2 2 3 4 SiHa/R组 裸鼠接种稳定转染　　 细胞转染质粒为pcDNA3.1(+)/rmBD2 SiHa/K组 裸鼠接种稳定转染　　 细胞转染质粒为pcDNA3.1(+) SiHa组 裸鼠接种未转染　　 细胞 Diameter (cm) Time (week) 图3-1 裸鼠移植瘤的生长曲线 Fig.3-1 curve of diameter change of human xenograft tumer in nude mice 结　果（一） 　 　 　 结　果（二） SiHa/M组　 SiHa/R组 SiHa/K组 SiHa组 　 　 结　果（三） SiHa/M组　 SiHa/R组 SiHa/K组 SiHa组 A B C D 　 结　果（四） SiHa/M组　 SiHa/R组 SiHa/K组 SiHa组 讨　论 SiHa/M组与SiHa/R组对肿瘤抑制作用 基因组成差别 诱导肿瘤组织凋亡 1 建立SiHa/M, SiHa/R, SiHa/k及未转染的SiHa细胞的裸鼠移植瘤模型 2 SiHa/M, SiHa/R组肿瘤生长慢于SiHa/k及SiHa组， SiHa/M组慢于SiHa/R 3 TUNEL染色证实mBD2可诱导肿瘤组织凋亡表明mBD2对肿瘤抑制作用，信号肽修饰蛋白优于未修饰组 * * * * LOGO * LOGO 小鼠Beta-防御素抗宫颈癌作用及其机制的研究 研 究 生 魏 晓 丽 导 师 李 明 远 教授 抗菌肽简介 (一) 抗菌肽是天然免疫的重要介质 是生物体内一类可诱导产生的、小分子量、 热稳定性强、具有广谱抗菌活性的可溶性多肽。 抗菌肽广泛存在 抗菌肽分为四类 cecropin样抗菌肽 分子内无Cys残基 富含脯氨酸残基的抗菌肽 分子量为2-4KD 富含Gly残基的抗菌肽 分子量为8-27KD 以上三类为碱性多肽，在昆虫淋巴液中诱导产生 富含Cys残基的抗菌肽 分子量为4－6KD，广泛存在 昆虫、哺乳动物和禽类以及植物中 抗菌肽简介（二） 防御素定义 防御素是最早发现的抗菌肽之一 分子中有3～4对二硫键 具有广谱的抗微生物活性 小分子多肽 防御素分类 ＆α－防御素 最早发现的防御素 ＆ β－防御素 防御素家族重要成员 ＆ 植物防御素 ＆ 昆虫防御素 抗肿瘤作用 抗寄生虫