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常见带型的类型
常见带型的类型 1、Q带(Q banding): Q显带是用荧光染料对染色体标本进行染色,然后在荧光显微镜下进行观察。Q显带技术是最早建立的显带技术,它在观察染色体多态方面有重要的用途。但Q带保存时间短,而且需要在荧光显微镜下进行观察,因而,限制了Q显带技术的应用。2、 G显带(G banding):染色体标本用热、碱、蛋白酶等预处理后,再用Giemsa染色,可以显示出与Q带相似的带纹。在光学显微镜下,可见Q带亮带相应的部 位,被Giemsa染成深带,而Q带暗带相应的部位被Giemsa染成浅带。这种显带技术称为G显带,所显示的带纹称为G带。G显带克服了Q显带的缺 点,G带标本可长期保存,而且可在光学显微镜下观察,因而得到了广泛的应用,是目前进行染色体分析的常规带型。 3、R显带(R banding):所显示的带纹与G带的深、浅带带纹正好相反,故称为R带(reversed band)。G带浅带如果发生异常,不易发现和识别,而R显带技术可以将G带浅带显示出易于识别的深带,所以R显带对分析染色体G带浅带部位的结构改变有 重要作用。 4、C显带(C banding):专门显示着丝粒的显带技术。C显带也可使第1、9、16号和Y染色体长臂的异染色质区染色。因而,C带可用来分析染色体这些部位的改变。 5、T显带(T banding):专门显示染色体端粒的显带技术,用来分析染色体端粒。 6、N显带(N banding):专门显示核仁组织区的显带技术。 7、 高分辨显带(high-resolution banding):分裂中期一套单倍染色体一般显示320条带。70年代后期,采用细胞同步化方法和改进的显带技术,获得细胞分裂前中期、晚前期或早前期 的分裂相,可以得到带纹更多的染色体,能显示550-850条带,甚至2000条带以上。这种显带技术称为高分辨显带技术。 8、姊妹染色单体 互换(SCE) :5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxy-uridine,BrdU)是脱氧胸腺嘧啶核苷的类似物,在DNA链的复制过程中,可替代胸腺嘧啶。 由于DNA的半保留复制,当细胞在含有BrdU的培养液中经过两个分裂周期后,两条姊妹染色单体的DNA链在化学组成上出现差别,即一条染色单体的DNA 双链中有一条链掺入了BrdU,另一条则为原来的模板,不含BrdU;而另一条染色单体的两条DNA链中的胸腺嘧啶核苷均被BrdU取代。固定原理:固 定是组织细胞或其成分选择性的固定于某个特定阶段的过程。其目的是杀死细胞,但又要避免所研究的成分受到破坏。固定的目的不止是提高染色体结构的可见性, 还应能显示染色体形态的细节,诸如染色质和异染色质、初级缢痕、次缢痕等,这就要求临界固定。细胞的膨胀和染色体的皱缩是决定固定剂质量的两个重要因素。固定剂的特性:1、为使染色体结构不破坏,按染色体的可见性及嗜碱性,就需要使染色体物质沉淀。2、能迅速穿透组织或细胞,并在瞬间杀死它们,使正在分裂的细胞立即停止在各自的时相上。3、能防止蛋白质的自溶作用。4、在细胞致死时,固定剂能起防腐作用,又能阻止分解细胞成分的作用。5、能增强染色体的嗜碱性,达到优良的染色效果。(甲醛能降低嗜碱性)(一)乙酸能使核酸沉淀,组蛋白溶解,但却不能固定细胞质蛋白。在染色体结构的研究中,乙酸的主要用途是阻止染色体收缩,使染色体结构免于破坏。经乙酸固定的物质,还能抵消甲醇的硬化作用。1、优点:乙酸作为混合固定液中的一种(1)可与任何一种固定剂同时使用,且可与任意比例的水、乙醇或甲醇混合;(2)可以用很低的浓度:1%~100%;(3)具有很强的穿透性能,甚至比乙醇的穿透性要高。这可能是因为它的离子较小的缘故。2、缺点:导致染色体片段的过分膨胀,故如要形成染色体的详细结构,必须把它与乙醇或类似的化学物质一道使用,后者能使组织收缩和硬化。(二)甲醇优点:迅速穿透组织,沉淀蛋白质,具有脱水性。蛋白质的不可逆转的变性,使组织硬化、脱水,固缩作用能迅速进入细胞。预固定可以慢慢脱水,防止细胞离心破裂。*乙醇不能有效固定染色质,原则上不与乙酸、甲醇或氯仿混合。药物作用1、TDR:抑制胸腺嘧啶核苷酸合成酶的活性,使dTMP合成下降,继而使DNA的合成受到阻断;然后同时洗脱,解除阻断,可使细胞分裂同步化。过量的TDR使染色体细胞停止在S期。2、Brdu:为胸苷类似物,加入后可渗入复制阶段,干扰DNA的二三级结构形成,使染色体延长。3、PHA:能够使终端细胞反分化,促进细胞的有丝分裂,增加其分裂指数。4、秋水仙素:能破坏纺锤丝的形成,将细胞控制在有丝分裂中期,使同源染色体不易二二分离。5、KCl:破坏红细胞,使核膨胀,染色体松软,迅速分散。0.075M KCl低渗液优点:染色
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