TRAIL 联合表阿霉素对人卵巢癌3AO细胞生长抑制作用研究.docVIP

TRAIL 联合表阿霉素对人卵巢癌3AO细胞生长抑制作用研究 　　【摘 要】目的：研究TRAIL 与表阿霉素联合应用对人卵巢癌3AO细胞的杀伤作用，探寻卵巢癌临床化疗的新方案。方法：将TRAIL 与表阿霉素单独及联合应用于体外培养的人卵巢癌3AO细胞， 采用MTT 法检测细胞毒性作用，并镜下观察凋亡细胞结构改变。结果：50ng/ mL的TRAIL 与5 μg/ mL 表阿霉素合用于3AO细胞24 h 时后，测细胞抑制率为82.44 % ，明显高于单用TRAIL （50 ng/ mL） 时的9.96 %及单用多柔比星（ 5 μg/ mL ） 时的18.98 % ， P 　　【关键词】TRAIL；表阿霉素；卵巢癌；化疗 　　【中图分类号】R737.31 【文献标识码】A 　　卵巢恶性肿瘤是常见的女性生殖器官恶性肿瘤，早期诊断困难，晚期治疗效果差，其死亡率居女性生殖系统恶性肿瘤之首。尽管某些化疗药可杀伤卵巢癌细胞，但其对正常组织造成的极大毒副反应已成为临床化疗时难以克服的瓶颈。近年来有关细胞凋亡的研究已成为寻找新的化疗药物和提高化疗疗效的热点。 　　TRAIL 因能选择性地诱导肿瘤细胞凋亡而成为近年来研究的热点，但因很多肿瘤细胞对其不敏感而使其临床应用受到很大限制。Takenari 等[ 1 ]认为，化疗药物与TRAIL 联合应用可提高肿瘤细胞对TRAIL 的敏感性，是一种有极大发展前景的抗肿瘤方案。但迄今为止有关TRAIL 与表阿霉素联合应用的报道很少，为此，我们将TRAIL 与表阿霉素单独及联合应用于体外培养的卵巢癌细胞株，以探寻增强TRAIL 敏感性的用药方案，为TRAIL 在卵巢癌化疗中的应用提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　人卵巢癌3AO细胞株购自中国科学院生物化学与细胞生物学研究所； RP- MI1640 干粉购自美国Gibco 公司； 胰蛋白酶、MTT及Rnase A 均购自华美生物工程公司；人重组可溶性TRAIL 购自上海广澜生物工程公司；酶标仪（Bio-Rad公司） ； LH50A 型倒置相差显微镜（OLYMPUS） ； 荧光显微镜（NIKON 公司） 。 　　1.2方法 　　1.2.1 细胞培养及给药方法 人卵巢癌3AO细胞株置于含10 %小牛血清的1640 培养液中，在37 ℃、5 % CO2 饱和湿度的培养箱中培养。待细胞进入对数生长期时，以5 ×105 mL - 1 浓度接种于培养板中，培养24h 待细胞贴壁后给药。单用TRAIL 组选用10 、50 、100 、1 000 ng/ mL 四种浓度；单用表阿霉素组选用1 、5 、10 、20μg/ mL 4 种浓度，联合应用组选用50 ng/ mL的TRAIL 与5μg/ mL 表阿霉素合用，同时设立PBS空白对照组。 　　1.2.2 MTT 法检测肿瘤细胞抑制率 将5 ×105mL - 1细胞接种于96 孔板，每孔200μL ， 贴壁后加入不同浓度药物或对照PBS 的细胞培养基，每孔100μL ，每种浓度平行4 孔，培养24 h 后，每孔加入20μL 新配制的5 mg/ mL 的MTT ， 37 ℃继续孵育4 h ， 弃上清加150μL DMSO 溶解， 混匀后在540 nm 波长测定吸光度。肿瘤细胞抑制率（ %） =1-实验组A值/对照组A 值×100 % 　　1.2.3 肿瘤细胞凋亡形态学观察 于倒置相差显微镜下直接观察肿瘤细胞形态，数目及贴壁情况。另取盖玻片置入六孔板内，种入3AO 细胞过夜，使约为50 %～80 %满时加药，待细胞凋亡后，固定10 min ，加入0.20mL染色液，染5 min 后，将盖玻片盖在滴有抗荧光淬灭封片液的载玻片上，荧光显微镜下照片。 　　1.2.4 统计学方法 实验数据以x ±s 表示，不同组之间的比较用单因素的方差分析，两组间的比较采用t 检验，应用SPSS 11.5 软件分析数据。 　　2 结果 　　2.1 三种给药方式下的肿瘤细胞抑制率变化 　　2.1.1 TRAIL 对人卵巢癌3AO细胞的抑制作用 　　人重组可溶性TRAIL 可抑制人卵巢癌3AO细胞增殖，并可见随药物浓度增加，对细胞杀伤作用也有缓慢提升。TRAIL 浓度为10 、50 、100 和1 000 ng/ mL时，细胞抑制率分别为（ 6.38 ±0.15 ） %、（ 9.96 ±0.40 ） %、（14.49 ±0.72） %和（52.59 ±1.92） %。经方差分析进行统计后表明，不同浓度间比较差异有统计学意义，P 　　2.2 人卵巢癌3AO 细胞凋亡的形态改变 　　相差显微镜下见单用TRAIL （50 ng/ mL） 及表阿霉素（5μg/ mL） 时仅部分细胞变小，变圆，偶尔可出现