检验师微生物讲义801.doc

第十八章　病原性球菌及检验 ? 　　本章考点：（掌握，熟练掌握）　　（1）概念　　（2）生物学性状　　（3）微生物学检查方法与原理　　（4）临床意义（致病性、所致疾病）　　　　普及共性，单记个性　　生物学性状　　形态与结构：革兰染色性，菌体形态，大小，排列状态，特殊结构。　　培养特性：对气体需求，营养要求，最适pH值，最适温度，在培养基中的生长现象。　　生化反应：特殊生化。　　抗原：　　分类：　　致病性　　致病物质　　所致疾病　　微生物学检查：针对生物学性状和致病性　　一、葡萄球菌属　　（一）概念　　一群革兰阳性球菌，因常堆聚成葡萄串状而得名。　　（二）生物学特性　　1.形态与结构：本属菌革兰染色阳性，呈圆球形，直径0.5～1.5／μm，不规则成堆排列，形似葡萄串状，在脓汁、肉浸液培养物中，可见单个，成对或短链排列。无鞭毛和芽胞，有些细菌能形成荚膜。　　2.培养特性：需氧或兼性厌氧，营养要求不高，通常在肉浸液及肉浸液琼脂或加入血液的培养基上生长良好。最适pH为7.4，最适温度为35℃～37℃。　　在普通琼脂平板上经35℃24～48h培养，可形成圆形、凸起、表面光滑湿润、边缘整齐并且不透明的菌落，直径为2～3mm。可产生不同的脂溶性色素，如金黄色、白色、柠檬色色素。　　在血琼脂平板上，几乎所有的葡萄球菌可产生α、β、γ和δ溶血素。对人致病的主要是α溶血素。　　在液体培养基（普通肉浸液）中生长迅速呈均匀混浊状。　　3.生化反应：触酶试验（+），对糖的发酵反应不规则，多数能分解葡萄糖、麦芽糖及蔗糖，产酸不产气。多数致病性葡萄球菌能分解甘露醇产酸、液化明胶和产生血浆凝固酶。　　4.抗原：葡萄球菌水解后，用沉淀法可获得两种抗原，即蛋白抗原和多糖抗原。　　（1）蛋白抗原：为完全抗原，有种属特异性，无型特异性。存在于葡萄球菌的表面，结合在细胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白（SPA）。　　（2）多糖抗原：是半抗原，具有型特异性，有三种：①A型多糖抗原；②B型多糖抗原；③C型多糖抗原。　　5.分类　　　　6.抵抗力：对理化因素抵抗力强，耐热，耐干燥，耐高盐，是抵抗力最强的无芽胞细菌。　　（三）致病性及临床意义 　　葡萄球菌感染的特点是感染部位组织的化脓、坏死和脓肿形成。金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌是引起临床感染最常见的葡萄球菌。　　1）金黄葡萄球菌　　　　　　2）表皮葡萄球菌是存在于皮肤的正常栖居菌，为医院感染的重要病原菌，它是导致血培养污染的常见细菌之一。　　3）腐生葡萄球菌是导致尿路感染的常见病原菌之一。　　（四）微生物学检验方法与原理　　1.标本采集：根据葡萄球菌感染所致的疾病不同，可采集脓汁、渗出液、伤口分泌物、血液、尿液、粪便、痰液以及脊髓液等。（不同疾病采集不同标本）　　2.检验方法及鉴定　　（1）直接镜检：无菌取脓汁、痰、渗出物和脑脊液（离心后取沉渣）涂片，经革兰染色后镜检，如为革兰阳性球菌呈葡萄状排列可初步报告为：“找到革兰阳性葡萄状排列球菌，疑为葡萄球菌”。　　（2）分离培养：血液标本（静脉血约5ml）注入50ml葡萄糖肉汤或含硫酸镁肉汤增菌培养，迅速摇匀，以防凝固，置35℃，一般于24h后开始观察有无细菌生长，若均匀混浊，溶血及胶胨状生长，则接种于血琼脂，进一步鉴定，若无细菌生长，于48～72h后自行观察（一般以7天为限），并接种血琼脂，以确定有无细菌生长。血液标本也可注入商品血培养瓶培养。　　脓汁、尿道分泌物、脑脊液离心沉淀物，通常可直接接种血琼脂。35℃18～24h培养，可见直径2～3mm，产生不同色素的菌落。金黄色葡萄球菌在菌落周围有透明的溶血环。　　尿液标本，必要时作细菌菌落计数。　　粪便、呕吐物应接种高盐卵黄或高盐甘露醇琼脂平板，经35℃18～24h培养，可形成细小菌落，48h后形成典型菌落。　　（3）鉴定试验 　　 　　金黄色葡萄球菌 　　表皮葡萄球菌 　　腐生葡萄球菌 　　触酶 　　+ 　　+ 　　+ 　　血浆凝固酶 　　+ 　　- 　　- 　　甘露醇发酵试验 　　+ 　　- 　　- 　　新生霉素敏感试验 　　S 　　S 　　R 　　　　报告：检出“XXX葡萄球菌”　　（4）耐药性检测：检测耐甲氧西林的金葡菌（MRSA），耐甲氧西林的表葡菌（MRSE），耐万古霉素的金黄色葡萄球菌（VRSA），耐万古霉素的表皮葡萄球菌（VRSE）。NCCLS／CLSI推荐用头孢西丁纸片法检测对苯唑西林耐药的葡萄球菌。　　二、链球菌属　　（一）概念　　链球菌属为触酶阴性，兼性厌氧，呈圆形或卵圆形的革兰阳性球菌，在液体培养基中生长时易形成长链而表现为沉淀生长（但肺炎链球菌为混浊生长）