宫颈PV筛查课件.pptVIP

宫颈脱落细胞HPV DNA检测 流行病学和分子生物学资料表明，人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染可引起子宫颈上皮内瘤变（CIN）及子宫颈癌的发生，并且不同HPV型别的致病能力也不同；高危型HPV的持续感染是促使宫颈癌发生的最主要因素。因此，HPV感染的早期发现、准确分型和病毒定量对于子宫颈癌防治具有重要意义，将HPV感染检测作为子宫颈癌及癌前病变的常规筛查手段已逐渐在临床推广。 （一）HPV的生理特性 HPV属于乳头多瘤空泡病毒科（papovaviridae）乳头瘤病毒属，是一种环状的双链DNA病毒，其核心是由约7800~7900个碱基对以共价键组成的含有遗传信息的闭合环状双链DNA，外为72个壳粒包被，形成对称的20面体。病毒外无包膜，直径约55nm，分子量约5.4kD。 HPV有多种基因型，目前已有120余种基因型被确定，其中约30种涉及生殖道感染。不同类型的HPV感染可导致不同临床病变。根据生物学特征和致癌潜能，HPV被分为高危型（high risk）和低危型（low risk）。高危型如HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68等与癌及癌前病变相关，低危型如HPV6、11、42、 43、44等主要与轻度鳞状上皮损伤和泌尿生殖系统疣、复发性呼吸道息肉相关。 HPV具有高度宿主特异性，适于在温暖、潮湿的环境生长，主要感染人体特异部位皮肤、黏膜的复层鳞状上皮。性接触为主要传染途径，病期在3个月左右传染性最强，其他途径如接触传播或母婴直接传播传染不能排除。 HPV感染率高主要取决于人群的年龄和性行为习惯。性活跃妇女的HPV感染率最高，感染高峰年龄在18~28岁。然而大部分妇女的HPV感染期比较短，在2~3年，一般在8~10个月便可自然消失，大约只有10%~15%的35岁以上妇女呈持续性感染。这种持续感染HPV的妇女，有更高的患子宫颈癌的风险。在妇女的一生中，可反复感染HPV，也可同时感染多种不同型别的HPV。HPV感染后通常没有明显临床症状，因此很难估计影响HPV感染的危险因素，除性行为习惯外，其他可能危险因素包括口服避孕药、妊娠以及细胞介导的免疫功能损害等。 （二）HPV感染与子宫颈癌及其癌前病变的关系 几乎所有流行病学资料结合实验室的数据都强有力地支持高危型HPV持续感染是子宫颈癌发生的必要条件：①99.7%的子宫颈癌中都能发现高危型HPV感染，高度病变（HSIL）中约97%为阳性，低度病变（LSIL）中的阳性率亦达61.4%。②实验动物和组织标本研究还表明HPVDNA检查的滴度与子宫颈癌病变的程度成正相关。③HPV感染与子宫颈癌的发生有时序关系，从感染开始至发展为子宫颈癌的时间间隔10~15年，符合生物学致病机制。 高危型HPV E6、E7基因编码的原癌蛋白是导致子宫颈上皮癌变的重要因子。E6蛋白通过E6-AP能特异性结合p53蛋白形成复合物。促使p53蛋白快速降解，导致细胞周期失控，其效应等同于p53突变。E7蛋白和pRb有高亲和性，使E2F和pRb复合物解离，G1期进入S期所需基因如c-myc、DNA聚合酶α等得以转录，使细胞周期失控而发生永生化。 来自世界范围的子宫颈癌组织标本的研究发现：在检出的所有型别中，HPV16占50%，HPV18占14%，HPV45占8%，HPV31占5%，其他型别HPV占23%。HPV16、18型感染很普遍，没有明显的地区差异。但其他HPV型别的感染存在地区差异，如HPV45型多见于非洲西部，HPV39、59型只在美洲中、南部出现，而HPV52、58在中国及东亚妇女中检出率较高。HPV的型别还与子宫颈癌的病理类型相关：子宫颈鳞癌中HPV16感染率约为56%，而子宫颈腺癌中HPV18感染率约为56%。 （三）HPV监测方法 大部分HPV感染无临床症状或为亚临床感染，不能作为一个普通的临床疾病或通过常规筛查计划或性传播疾病调查得以发现，只能通过HPV检测得知。由于HPV不能在体外细胞培养，故不能有简便的血清学检测进行HPV诊断和分型。临床上用于检测HPV的方法包括细胞学方法、免疫组化、原位杂交、斑点杂交、核酸印迹和PCR等。 1.传统检测方法 主要通过形态学和免疫学方法对HPV进行检测。前者包括巴氏涂片细胞病理学检测、电镜技术（直接观察病毒颗粒）、宫颈荧光检查等；后者包括免疫组化法通过抗HPVL1蛋白抗体与外壳蛋白反应检测HPV，采用放射免疫沉淀法测定CIN组织和血清中的HPV16抗体水平、用血清免疫吸附试验（ELISA）检测血清中的HPVE6、E7特异性抗体蛋白等。 传统方法的特异度和灵敏度均不够理想，存在较高的假阳性率和假阴性率，且不便于对HPV进行分型，目前应用较少。 2.PCR检测HPV