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PAGE PAGE 1 New Study--以CLA—ID3自由基測定儀測超氧陰離子和總氧自由基 洪彩霞 2010/0 洪彩霞審核 2010/ 目的: 以lucigenin和luminol分別測定血液或細胞培養液樣品中，所含超氧陰離子(superoxide anion)和總氧自由基(H2O2, ROO)的量，其間反應總量以Chemiluminescence Analyzer自由基測定儀 (機型 CLA-ID3, 220 volts, Tohoku Electronic Industrial Co., Ltd)測定。 實驗重點: 所有新計畫的自由基含量測試，皆固定使用 1.0 ml 310μM luminol和1.0 ml 97.9 μM lucigenin作為反應劑；反應劑量維持不變，研究者依自己研究的樣品自由基含量而調整使用的樣品量；即反應劑量固定不變，樣品的用量則依實驗需要做調整。 原理: 化合物因化學反應，激發至高能階狀態(自由基狀態)，當化合物從高能階狀態回到低能階狀態(穩定狀態)時，由於能量的轉移，會使得化合物，以光的方式釋放能量，因而產生光子。CLA—ID3自由基測定儀以高感度的光電倍增管(photomultiplier tube)測定這些光子數，進而推斷自由基的數量。Lucigenin 和luminol作用為反應劑，充分和自由基反應，使之放出光子。 材料 溶液材料: lucigenin和luminol兩種溶液依Lucigenin和Luminol配製方法的SOP配製，儲存於台大醫院新大樓南04-0, 4C2實驗室4℃冰箱內。克司博75%酒精液(台灣派頓)。Deionized water。無水酒精(Merck , Cat. no. 1.00983.1000 耗材材料: 每位操作Free Radicle的人向壁如領雙倍份反應槽和兩顆磁石。為避免因清洗反應槽，留下殘餘的水分影響反應，所以規定每次要用完全乾的反應槽做實驗。 抽血用無菌1 c. c. ABG空針 (BD A-Line, REF364356, Ca+2 LH~30 I.U.) 在兩支3 c. c. syringe 的1.1 c. c. 至0 c. c. 刻度之間以不透光膠帶將針筒整個包住，並在不透光膠布上分別寫上LM(luminol)或C(lucigenin)，這兩支luminol與lucigenin專用針筒分別放於台大醫院新大樓南04-0, 4C2實驗室內的實驗桌的抽屜內，分裝在兩個籃子裡，分別用於吸入luminol和lucigenin，兩者分開，不要混用。 4個磁石放於兩個Eppendorf tubes內，再放在同樣的抽屜裡。 細長的兩支金屬針，針頭上寫著M用於注射luminol，針頭上寫著C的用於注射luciginen。使用時，M與C的字母標誌應朝上，如此，長針的針口就會朝下，注射的液體就會直接掉落到下面的反應槽。 PROTOS?多倍乳膠檢診手套(PT. LATEXINDO TOBAPERKASA) Kimwipes (Kimberly-Clark Worldwide, Cat. No. 34120) 200μl pipette tips (Axygen TR-222-C, Sorenson Cat. No. 15720,皆為由永吉代理) 200 μl pipetteman (Gilson, P200)一支 1.5 ml Eppendorf tubes (DELTALAB AD-4092.5N)或2 ml centrifuge tube (慧眾, Cat. No. ET0200) 鋁箔紙 (妙潔; Diamond) 避光袋 (避光袋原來是裝需避光的物品，當袋內的物品用完後，剩下的避光袋子，再加以利用)。 冰桶 檢體準備 操作者在整個過程操作中，必須戴手套。 以無菌1 c. c. ABG空針抽病人1 c. c. 的全血。抽完血，馬上將含血的針筒放入避光袋或以鋁箔紙包住針筒，並 到實驗室，將1 c. c. 全血注入以鋁箔紙或避光袋包住之Eppendorf管子裏，再將管子置入冰桶內。 儀器/地點 儀器型號/地點: Chemiluminescence Analyzer自由基測定儀 (機型 CLA-ID3, 220 volts, Tohoku Electronic Industrial Co., Ltd)位於台大醫院新大樓南04-0, 4C2實驗室。 儀器準備 將穩壓器power打開，接著按下output start按紐，讓穩壓器維持在綠色範圍(keep 50 ~ 110V)。 將連接到電腦、冷媒機、stir plate及printer的extension cord開關打