中药复方对糖基化终末产物培养下肾小球系膜细胞增殖以及系膜基质增生影响.docVIP

中药复方对糖基化终末产物培养下的肾小球系膜细胞增殖以及系膜基质增生的影响 作者：王琼,汪宁,余黎,陈立军,朱荃 【摘要】 目的 观察中药复方对糖基化终末产物(AGEs)培养下的肾小球系膜细胞增殖以及细胞外基质分泌的影响。方法 MTT法检测肾小球系膜细胞的增殖,碱解法检测细胞上清液中羟脯氨酸的含量。结果 1×10-3、1×10-2、1×10-1 mg/mL的中药复方提取液均能抑制AGEs培养下的鼠肾小球系膜细胞的增殖；能减少AGEs作用下的细胞上清液中羟脯氨酸含量,抑制系膜基质增生。结论 中药复方能抑制AGEs引起的大鼠肾小球系膜细胞增殖以及系膜基质增生,提示此方可能通过阻止AGEs受体信号通路抑制糖尿病肾病的发生发展。 【关键词】 糖基化终末产物；系膜细胞增殖；系膜基质增生；糖尿病肾病；中药复方 Abstract：Objective To observe the effect of the prescription on the progress of mesangial cell proliferation and matrix secreted induced by AGEs. Method The proliferation of glomerular mesangial cell cultured in media was measured by MTT. Hydroxyproline level was measured by alkaline hydrolysis. Result The proliferation of mesangial cells were obviously increased by AGEs (0.25 mg/mL). The proliferation mesangian cells and the hydroxyproline levels were suppressed by the prescription of the concentration 1×10-3, 1×10-2, 1×10-1 mg/mL. Conclusion The prescription could suppress the proliferation of mesangial cells and extracellular matrix induced by AGEs. It suggested that the prescription play a significant role in the prevention of diabetic nephropathy by inhibiting the AGEs receptor. Key words：AGEs；mesangial cell proliferation；matrix secreted；diabetic nephropathy；the prescription 糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病最严重的并发症,又称“糖尿病肾小球硬化症”。肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cells,GMC)是肾小球中最活跃的反应性细胞,其病理变化在DN的发生和发展中居于中心地位[1]。持续高血糖状态下体内蛋白质发生非酶促糖基化反应和最后形成的糖基化终末产物(advanced glycation end products, AGEs)在DN发生机制中具有重要意义[2]。本实验采用体外AGEs培养的大鼠肾小球系膜细胞,观察健脾益气、补益肝肾、活血利水中药复方对其增殖以及系膜基质增生的影响,探讨延缓肾小球硬化的作用机制,为中医药治疗糖尿病肾病提供依据。 1 一般资料 1.1 试剂和药物 大黄、黄芪、川芎、白术、茯苓、菊花等药材均购自南京中医药大学门诊部,经南京中医药大学王春根教授鉴定。DMEM培养基,Invitrogen Corporation；新生牛血清,杭州四季清血清厂；Thiazolyl 噻唑蓝,Amresco分装,怡成生物,0263；二甲基亚砜(DMSO),AR级,上海久仡化学试剂有限公司；羟脯氨酸试剂盒,南京建成生物工程研究所 　　1.2 仪器 CO2培养箱,NAPC05410,PERCISION SCIENTIFIC；XSZ-D2倒置显微镜,重庆光学仪器厂；超净工作台,苏州百神科技网络系统有限公司,苏州市洁净技术研究所；Microplate pectrophotometer,SPECTRA max190,美国AD公司；医用离心机,LDZ5-2,北京医用离心机厂。 　　1.3 细胞株 大鼠肾小球系膜细胞株HBZY21,武汉细胞生物研究所提供。 　　2 实验方法