猪链球菌2型超氧化物歧化酶soda与丝氨酸苏氨酸去磷酸酶stp1影响细菌毒力研究-预防兽医学专业论文.docx

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猪链球菌2型超氧化物歧化酶soda与丝氨酸苏氨酸去磷酸酶stp1影响细菌毒力研究-预防兽医学专业论文

浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得逝婆太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名:南丽牟签字日期洲睁鸸月巧日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逝选太堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权逝堑太堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名:自雨牮.导师签名:签字日期:M睁D明6日签字日期潮I年。绸哆日万方数据浙江大学博士学位论文目录目录摘要..。1Abstract..IV第—部分文献综述.1第一章猪链球菌2童致病机制研宄进展.11猪链球菌2型主要毒力相关因子j.11.1粘附相关毒力因子..21.2抗氧化应激相关毒力因子一41.3溶血素..42猪链球菌2墅感染细胞机制..52.1黏附机制.52.2侵袭机制.62.3炎症和突破血脑屏障机制..7第二章细曹感染与细胞自噬及凋亡.9l细菌感染与细胞自噬102活性氧与自噬133猪链球菌2型感染与细胞凋亡17第三章细菌磷酸化调控机制181细菌的二元信号转导系统182原核生物丝氨酸/苏氨酸磷酸酶调控机制183链球菌属细菌的丝氨酸/苏氨酸激酶与磷酸酶20本研宄拟解决的科学问囊.22第二部分试验研究。23第四章猪链球菌2型sodA基因缺失对细胞黏附及表面蛋白表达的影响241jIj肇U蓟亨祛。251.1菌株与质粒251.2酶与试剂251.3黏附试验251.4黏附及毒力相关因子转录水平定量PCR检测。261.5硫氧还蛋白的原核表达281.6多克隆抗体制备341.7多抗效价检测341.8免疫印迹351.9细菌表面蛋白制备361.10二维电泳.361.11质谱鉴定..4l2结果..432.1soda基因缺失显著增强猪链球菌2型对细胞的黏附432.2soda基因缺失对猪链球菌2型毒力相关因子表达的影响“2.3soda基因缺失影响猪链球菌2型表面蛋白的表达差异45万方数据浙江大学博士学位论文目录2.4猪链球菌2型硫氧还蛋白Trx]和Trx2表达纯化及多抗鉴定.482.5sodA基因缺失对猪链球菌2型硫氧还蛋白Trxl及Trx2表达的影响.503讨论。第五章猪链球菌2型sodA基因缺失诱导小鼠巨氆细胞自麓531捌舳方法。541.1菌株与质粒541.2酶与试剂551.3猪链球菌2型SodA原核表达与纯化.551.4SodA多克隆抗体的制备及效价测定561.5抗氧化应激试验561.6小鼠单核巨噬细胞培养与细菌感染571.7免疫印迹571.8激光共聚焦571.9活性氧ROS的检测..581.10细胞活力检测.591.11SodA活性检测方法一591.12IL.1B转录水平检测601.13流式细胞术检测细胞凋亡一602结果2.1soot4基因缺失在BHI培养基中的生长次于亲本菌株612.2soda基因缺失显著降低体外ROS环境中的抗氧化能力一612.3SodA蛋白具有催化活性..622.4soda基因缺失显著降低体外无细胞培养系统中ROS的清除能力..622.5soda基因缺失株诱导自噬632.6自噬对猪链球菌2型在吞噬细胞内存活的影响672.7sodA基因缺失株感染细胞内ROS增加..672.8sodA缺失对细胞内IL-1B转录水平的影响.702.9sodA缺失不影响细胞活力702.10soda缺失不影响细胞凋亡与坏死。713讨论..73第六章猪链球菌2型丝姗虏氨馥■蕞蛋I-.75Stpl影响细菌毒力与蛋白穰化水平研宄751刺料与方法761.1质粒与菌株761.2主要酶与试剂771.3stpl基因缺失株构建.771.4透射电镜样本制备方法801.5Stpl蛋白原核表达及多抗制各8l1.6Stpl蛋白去磷酸化活性检测811.7体外抗过氧化物试验811.8细菌粘附试验82万方数据浙江大学博士学位论文目录1.9小鼠巨噬细胞存活试验821.10小鼠毒力试验.82】.11二维电泳免疫印迹与质谱分析一821.12SodA蛋白体外磷酸化和去磷酸化.832结果..842.1猪链球菌2型j舶,基因缺失株的鉴定842.2缺失株△s印l的菌体形态发生变化862.3缺失s纫J基因对体外抗氧化应激能力的影响872.4重组蛋白Stpl的去磷酸化作用一872.5缺失株△stpl及其亲本株对BALB/c小鼠毒力比较.882.6缺失stp,基因对细胞黏附与抗吞噬作用差异比较892.7缺失sip,基因对小鼠巨

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