基因工程基本操作程序 (2).pptVIP

基因工程的基本操作程序 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 （一）目的基因的提取 目的基因：主要是指___________________ 。 获取方法： 1、____________中获取目的基因 2、 PCR反应扩增DNA 3、人工合成法：如果基因比较小，核苷酸序列又已知，也可以通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。 基本操作步骤 从基因文库 编码蛋白质的结构基因 1.从基因文库中获取目的基因 基因文库： 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 基因文库 基因组文库 部分基因文库 （如cDNA文库） 一种生物所有的基因 一种生物的一部分基因 基因文库的构建过程 基因组文库 限制酶 供体细胞的 全部DNA 大量DNA 片段 拼接到载体上 导入受体细胞扩增 目的基因的mRNA 单链DNA (cDNA） 双链DNA (即目的基因) 反转录 合成 1）反转录法： 以目的基因转录成的mRNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 目的基因 推测 推测 化学合成 2）根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ： 3、人工合成