乙酰紫草素对小鼠肝癌移植性肿瘤抑制作用初步研究.docVIP

乙酰紫草素对小鼠肝癌移植性肿瘤的抑制作用初步研究 作者：赵颖 郑小卫 邵振俊 周黎明 【摘要】 目的：观察乙酰紫草素对小鼠移植性肝癌H22的抑瘤作用。方法 :采用小鼠肝癌H22模型进行体内抑瘤实验。观察荷瘤动物的生长情况，测量各实验组肿瘤体积及瘤质量变化，绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率 。结果：乙酰紫草素低、中、高三个剂量组的抑瘤率分别为23.39％、26.61％、37.90％ (Plt;0.05)。各实验组小鼠免疫器官未见明显抑制。结论：乙酰紫草素对小鼠肝癌H22具有一定的抑制作用。 【关键词】 乙酰紫草素；抑瘤作用；小鼠肝癌H22 中药紫草在我国有悠久的药用历史,其味甘、咸,性寒,归心包络、肝经,有凉血、活血、清热、解毒透疹等功效,中医临床主要用于湿性斑疹、紫癜、血尿、淋浊和血痢、热结便秘、痈疡等病。现代研究发现，紫草的化学成份复杂，不但具有抗菌、抗病毒、抗生育，而且国内外研究均有报道证实其抗肿瘤活性，为一具有开发价值的抗肿瘤中药。紫草主要的抗癌有效成分为萘醌类色素化合物，即紫草素及其衍生物，尤其以乙酰紫草素和β,β二甲基丙烯紫草素为主要抗癌成分[1]。前期实验[2，3，4，5，6，7]证实紫草素对人大肠癌细胞株CCL229、宫颈癌细胞HeLa、表皮细胞癌细胞A431、人黑色素瘤细胞A375S2、急性单核细胞白血病HL60及K562等多种肿瘤细胞的增殖均有抑制作用。本研究以小鼠移植瘤H22（肝癌）为对象，探讨新疆紫草细胞培养物中的乙酰紫草素对小鼠移植瘤H22（肝癌）的影响。 1材料与方法 1.1 材料 1.1.1 动物昆明种小鼠，体重(20±2) g ,雄性,购于四川大学实验动物中心。H22瘤株,华西基础药理室保存。 1.1.2 药物乙酰紫草素注射液（2 mg·ml-1），由德阳华康药业提供。与助溶剂2：1混合后，用葡萄糖稀释成0.2 mg·ml-1、0.1 mg·ml-1、0.05 mg·ml-13 种不同剂量的溶液，为实验用药。环磷酰胺,白色粉状针剂，0.2g/瓶，批号：060413，贮存液浓度20 mg·ml-1，作用浓度6 mg·ml-1。 1.2方法 1.2. 1荷瘤模型的制备 接种h22瘤株的小鼠在水和饲料充足的条件下喂养7 d ,无菌抽取接种后7 d 的小鼠乳白色浓稠腹水，用生理盐水稀释成(1∶2) 的液体充分混合，将瘤细胞悬液用台盼兰染色,混匀后在血细胞计数器上计数。染蓝色者为死细胞,不染色者为活细胞,计算活细胞数，调整细胞数至每毫升悬液为2×107瘤细胞,且活细胞数大于95%，然后用1 ml注射器以0.2 ml/只接种于被试60只雄性昆明种小鼠腋下,制作成动物模型。 1.2.2动物分组及给药方法 肿瘤接种24小时后,严格按随机数字表示分成5组（助溶剂对照组，乙酰紫草素高、中、低剂量组，环磷酰胺组），每组9只，作S180肉瘤的抑瘤率实验。阳性对照环磷酰胺组剂量为60mg.kg-1，首日腹腔注射给药，乙酰紫草素高、中、低剂量组(0.2，0.1，0.05 mg·kg-1 )腹腔注射给药，隔天给药1次，共给药5次。溶剂对照组溶剂浓度与高剂量组相同，腹腔给药，隔天给药1次，共给药5次。 1.2.3检测指标及方法:1) 肿瘤生长曲线:接种后观察肿瘤生长情况，并用游标卡尺测量肿瘤长径与短径（分别记为a,b），按照公式肿瘤体积=ab2/2计算体积，以体积为纵坐标，测量次数为纵坐标绘制曲线。2) 实体瘤抑瘤率、免疫器官脏器系数的测定: 于第10天脱颈椎处死小鼠,称取体重，用镊子镊住小鼠右腋肿瘤生长部位皮肤后,然后用手术剪子剪开皮肤,暴露肿瘤,用手术剪钝性剥离肿瘤，并摘取胸腺、脾脏称重,计算抑瘤率、免疫器官的脏器系数。肿瘤抑制率( %) = [1-(平均实验组瘤重/ 平均对照组瘤重) ]×100 %，脾脏系数= [脾脏(mg)重量/体重(g)]×100%，胸腺系数= [脾脏(mg)重量/体重(g)]×100%. 1.2. 4统计方法结果以 X±s表示,统计方法为双侧t检验。 2结果 2.1 肿瘤生长曲线，如图1 图1 乙酰紫草素对小鼠移植性肿瘤H22的生长抑制作用 2.2 对荷瘤小鼠的抑制率 乙酰紫草素高剂量组对小鼠H22移植性肿瘤生长有明显的抑制作用，抑制率为37.90%( Plt;0.05),见图1和表1。表1 乙酰紫草素对小鼠H22移植性肿瘤生长抑制作用 2.3 对小鼠免疫器官的影响表2 乙酰紫草素对荷瘤小鼠免疫器官的影响 由表2可知，乙酰紫草素注射液高中低剂量组小鼠胸腺、脾系数与溶剂对照组比较,无显著性差异( P＞0.05) ,而环磷酰胺组与溶剂对照组比较，胸腺、脾系数有显著性差异( P＜0.05)，说明乙酰紫草素注射液对小鼠免疫系统无显著影响而环磷酰胺对小鼠免疫系统有显著