实验三细胞骨架标本的制备及观察.pptVIP

实验三 细胞骨架标本的制备及观察 一、实验目的 1. 掌握细胞骨架的显示方法的原理。 2．熟悉光学显微镜下细胞骨架的基本形态结构。 3. 了解细胞骨架标本的制备方法。 二、实验材料 洋葱鳞茎、光学显微镜、水浴箱、载玻片、盖玻片、吸管、培养皿、青霉素小瓶、镊子、剪子、擦镜纸、吸水纸、二甲苯、香柏油、pH7.2 PBS（无钙镁磷酸缓冲液）、pH6.5 PBS、M-缓冲液（10×原液）、1% TritonX-100、2%TritonX-100、3%戊二醛液、0.2%考马斯亮兰染液。 三、实验原理 细胞骨架是真核细胞内由蛋白质纤维构成的网络结构。当用适当浓度的TritonX-100（聚乙二醇辛基苯基醚，是一种非离子去垢剂）处理细胞时，可将质膜中及细胞内许多蛋白质溶解，而细胞骨架系统的蛋白质却不被破坏，经固定和考马斯亮兰（非特异性蛋白质染料）染色后，可使细胞骨架蛋白着色而显示骨架显微结构。由于骨架系统中有些纤维（如微管）在该实验条件下不够稳定，而有些类型的纤维太细，在光镜下无法分辨，因此显示看到的主要是微丝组成的微丝束。采用活体染色等方法制备细胞骨架标本，加强动手能力和了解临时制片的方法。 四、实验方法 1. 洋葱鳞茎表皮细胞细胞骨架标本制备 （1） 撕取约5×5mm大小的洋葱鳞茎中层鳞片的内表皮，浸入pH6.5 PBS中5min后，再放入盛有2%TritonX-100液的