分子生物学-2015-10-21 基因诊断与基因治疗.pptVIP

脂质体法： 受体介导的基因转移 直接注射法 基因治疗载体的选择： 2. 质粒载体 脂质体与DNA形成复合物， 细胞通过内吞作用摄入。 缺乏高效、靶向、安全的基因转移系统； 缺乏调控外源基因表达的方式； 外源基因导入对机体带来不利影响等。 插入染色体 基因治疗尚有重要问题待解决 Gene therapy is in its infancy, but promising 展望 Maybe , in the new century, gene therapy will become common practice. Tomorrows physicians will be molecular surgeons. Thanks！ The number of repeats for a given mini- or micro-satellite may differ between individuals. This feature is the basis of DNA fingerprinting. * biological daughter, biological son of a couple daughter of the Mom and her former husband adopted son, not biologically related * * 35 35 Gene Diagnosis 传统对疾病的诊断主要以疾病的表型改变（细胞形态结构变化，代谢产物异常，特定蛋白分子识别差异等）为依据，如临床诊断、生化诊断、免疫学诊断等。 然而，表型改变在许多情况下并不特异，而且在疾病发生的一定时间后才出现。 表型的改变是由基因异常造成的；基因的改变是引起疾病的根本原因。 若已明确疾病表型与基因型的关系，则可进行基因诊断。 基因诊断 利用分子生物学及分子遗传学的技术和原理，在DNA水平分析、鉴定、遗传性疾病所涉及基因的置换、缺失或插入等突变。 包括检测个体的基因序列特征、基因突变、基因的拷贝数及是否存在病原体基因等。 正常人 杂合子 患者 纯合子 1. 基因序列分析 2. Southern 印记法 分析基因大片段丢失 先将DNA的PCR产物如图纵向点2复孔；然后如图剪开，分别与合成的等位基因特异性寡核苷酸探针(allele specific oligonucleotide, ASO): w Probe 和 m Probe杂交 w/w w/m m/m 检测基因的点突变 正常序列的探针 常见突变序列的探针 3种基因型的 DNA样品 2.用等位基因特异性寡核苷酸探针进行的点杂交 突变 杂合子 镰状红细胞贫血患者基因诊断 正常的（N）的ASO探针： 5′-ACT CCT GAG GAG AAG TCT GC-3′ 突变的（M）的ASO探针： 5′-ACT CCT GTG GAG GAAG TCT GC-3′ allele specific oligonucleotide (ASO) probes 正常序列的探针 突变序列的探针 此技术 : 一个杂交袋内进能用一种探针 ! 检测 多种突变（需要多种探针）时就显得很麻烦！ 正常 纯合子 突变纯合子 问：与正常探针和突变探针都不能杂交？ 答：突变基因不属于已发 现的类型。 前提：知道常见的基因突变的部位和性质 合成等位基因特异性寡核苷酸探针(ASO): w Probe 和 m Probe 先将探针点到NC膜上 然后将人该基因PCR产物和已经在膜上的探针进行斑点杂交。 一次检查可以同时筛查多种突变！ 3.应用 ASO 探针进行的反向点杂交 HPV Genotyping Assays P A B C M A: RSaI; B: Hae III; C: PstI ; Patient 1: Patient 2: 2000 1000 750 500 250 100 可以对HPV病毒的型别进行初步的定性分析。 P A B C M M: DNA marker DL 2000bp； P: PCR product of L1 gene in HPV； 4.限制性片段长度多态性分析（RFLP） 检测HBV DNA 利用已知的梯度浓度的标准样品作出标准曲线。 通过未知样品的Ct值,从标准曲线上计算出该样品的起始浓度。 荧光强度---循环数曲线 初始模板量对数---循环数曲线 . 未知 104 10