DNA电化学物传感器中的新方法学研讨.pdfVIP

DNA电化学生物传感器中的新方法学研究 摘要 随着疾病诊断、基因测试、法医鉴证、生化战争预防、环境监测等领域的发 展，对特定DNA序列进行准确、简单、快速的检测越显重要。DNA生物传感器 主要是利用碱基互补原理对目标DNA进行检测，当已知序列DNA探针与被检 的DNA序列发生杂交反应，来辨明DNA的存在与否。其中，电化学DNA生物 传感器利用杂交原理及电化学标记物为杂交检测信号，具有操作简便快速、信号 灵敏，能与DNA生物芯片兼容等优点，具有非常重要的研究价值。目前电化学 DNA检测方法以其轻巧便宜、高灵敏度、方便携带、能耗少、易于实现微型化 等优点，受到了广泛的关注，成为当今生物学、医学领域的前沿性课题。 纳米技术的出现为各个科学领域提供新的发展前景。纳米微粒具有的特点 有：大比表面积、高活性、高特异物性、极微小性等，与传感器所要求的多功能、 微型化相互匹配。作为理想的传感器材料，需要有着高灵敏度、多样功能性、响 应高，速度快、检测范围宽、选择性高、稳定性好。纳米微粒能很好地满足上述 要求。以纳米材料为原料的化学传感器能够应用于生产、生活、环境监测等各个 领域：目前单分子水平的探针制备技术、纳米集成阵列电极、修饰电极等方面的 研究取得巨大的进展。 超分子化学是分子之间通过非共价键相互作用而形成的分子聚集体的化学 学科，随着与医药科学、生命生物科学、信息科学、纳米材料科学的交叉融合中， 超分子化学已发展为应用范围广泛的超分子科学。被认为是21世纪新思路和高 科技的重要基础学科之一。环糊精作为典型的超分子识别个体中的重要主体化合 物以其独特的识别性质受到广泛的关注。对它的研究从主客体识别形成包合物的 机理已经转移到对其在分析化学、医药制备、环境检测和生物传感器等领域的应 用研究。 本论文的主要创新之处就是将纳米技术及超分子包合作用相互融合构建了 不需要固定探针的新型DNA电化学生物传感器。同时基于生物分子之间的替代 作用等与电化学分析技术相结合构建了用于检测DNA及凝血酶蛋白的电化学传 感器。这两种传感器具有高特异性，及构建简单，能够成功地应用于对特定序列 DNA片断的选择性测定和对目标蛋白的准确识别，为基因及蛋白质分析测定提 供了一种简便、便捷、廉价的新理念。 第一章绪论 首先介绍了DNA电化学生物传感器的研究进展。着重介绍了DNA生物传 感器的原理(包括DNA探针及其分子识别原理和探针DNA在固体基质表面的 固定化)和DNA生物传感器中不同的杂交电化学标示剂，叙述了DNA电化学传 感器在基因检测等方面的应用。接着介绍了核酸适配体生物传感器和碳纳米管在 生物传感器中的一系列应用。最后阐述了本论文的目的和意义，指出论文的创新 之处及主要研究内容。 第二章基于蛋白与其核酸适配体的替代机理构建的凝血酶电化学生物传感器的 研究 我们基于目标蛋白与其核酸适配体替代机制构建的设计了一种电化学适体 传感器。该传感器预先将含有巯基的单链固定DNA(IP)与目标凝血酶(衄ombin) 于金电极表面，而另一标记有CdS纳米颗粒的单链DNA(DP．CdS)被用作检测探 针。当预先制备好的双链DNA修饰金电极浸入含有凝血酶与DP．CdS的共存的 粒溶解，使用汞膜电极对溶出的Cd2+离子进行电化学检测，获得灵敏的电化学信 有良好的线性响应，检出限为4．3×10。13mol／L。检测具有良好的特异性，BSA， 溶菌酶等其他蛋白质共存不会影响tllroInbin的检测。 第三章基于DNA竞争替代机理的电化学开关生物传感器的研究 我们设计了一种基于DNA之间杂交竞争替代机制的电化学DNA传感器。 该传感器通过预先将3’修饰了巯基，5’修饰了二茂铁的发夹探针DNA与识别 DNA杂交形成双链DNA，然后通过金硫键将其组装于金电极表面。此时二茂铁 位于双链DNA的顶端，远离电极表面，呈现出“S谢tch．ofr状态，仅仅产生一 个小的背景信号。目标DNA加入后，由于与识别DNA之间具有更多互补碱基， 在杂交的竞争作用下，识别DNA离开探针DNA，与目标结合，探针DNA随之恢 复原有的发夹状态，二茂铁靠近电极表面，呈现出“S谢tch．on状态，同时获得 一个较大的电化学信号。通过目标加入前后电化学信号变化，可实现对目标的检 测。本文将适体技术、电化学分子信标技术相结合，实现了对目标DNA和蛋白 质的灵敏、高效、方便的检测。此电化学竞争开关生物传感器有望在生物