东南大学研究生论文选题开题报告的原则与要求.docVIP

明德至诚博学远志 福建省农业科学院 全日制学术学位研究生 学位论文开题报告 论文题目： 青枯雷尔氏菌致病力分化及特征色谱的建立 报 告 人： 余谦 申请学位： 工学硕士学位 所在学院： 生物科学与工程学院 年级/学号： 2010 100820047 学科专业： 发酵工程 研究方向： 应用微生物及代谢工程 指导教师： 刘波 博士 研究员 报告时间： 2012年1月6日 福州大学研究生院 制表 2012年1月6日填 一、国内外关于该选题的研究现状及趋势（综述报告，申请博士学位者不少于5000字，申请硕士学位者不少于3000字）： 1.1课题选题依据 青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)，属于革兰氏阴性b蛋白类细菌。雷尔氏菌引起的植物细菌性青枯病害(Bacterial wilt)，简称青枯病，是一种世界范围的细菌性土传病害。该菌寄主广泛，能够侵染热带和温带地区多达450种以上的植物种类，严重影响了很多重要经济作物，比如番茄、烟草、辣椒等的产量。该病原菌从寄主植物的根部，入侵木质部导管，通过维管束系统迅速扩张到植物的地上部分，病菌的大量定殖引起导管功能丧失，进而引发植物萎蔫，导致植物死亡。感染青枯病后，一般成株期发病，先是顶叶萎蔫下垂，然后下部叶片凋萎，最后中部叶片凋萎，也有一侧叶片先萎蔫或全株叶片同时萎蔫。给农业生产造成极大的经济损失。植株死亡后叶片仍保持青绿色。青枯病的防治目前还没有有效的化学农药防治且易造成环境污染和残留青枯菌的菌体呈长椭圆形，近杆状，革兰氏染色为阴性，菌体大小为0.5-0.8×1.3-2.2 微米，极生鞭毛1-4根，不形成荚膜和芽孢。菌体内均有聚β－羟基丁酸盐颗粒，在光学显微镜或者电子显微镜下显示两极着色较深。青枯菌在不同寄主上的菌落形态没有明显差异，在肉汁琼脂平板上，32℃下培养48小时后，均出现直径为1-4mm的灰白色不规则或近圆形菌落，边沿光滑。青枯菌为好气性细菌，在厌气条件下培养，致病性会迅速丧失，30℃在TTC（红四氮唑，2，3，5－三苯基氯化四氮唑）培养基上划线培养48h，会出现两种菌落形态：一种是致病性强的野生型菌株，其菌落呈不规则或近圆形，具有较宽的白边，流动性强，菌落中心呈粉红色；另一种是致病力弱或者丧失致病力的变异株，干燥而扁平，菌落白边很窄或没有，中心呈暗红色对离子交换柱吸附能力的差异而使其分离，而不同致病性的青枯菌表面附着的多糖和蛋白是不一样的，在一定pH条件下可以利用将其分开。目前，PCR技术在青枯雷尔氏菌多态性的分析多见于国外报道，利用PCR技术可将青枯雷尔氏菌按不同生化型、不同寄主、不同致病型以及不同来源区分出来，并且利用该技术还可将青枯雷尔氏菌按照生化变种3型与生化变种1型和2型区分出来（Horita and Tsuchiya, 2001; Norman et al., 2009; Khakvar, 2009）。目前在我国利用PCR技术对青枯雷尔氏菌多态性研究的报道不多PCR技术的结合对对阐明青枯菌的多态性及其在传代培养过程中致病性逐渐减弱的内在理，最终研制出特效的青枯菌抗菌剂具有重要意义。 近些年来，许多研究人员采用BOX-PCR和REP-PCR技术所采用的-PCR和REP-PCR技术是一种快速而有效的DNA指纹技术，具有分辨率高、稳定、重现性好简便易行等特点，能反映出种和菌株水平的基因型、系统发育和分类学关系，特别适合对大量菌株分析 2.1、研究意义 目前检测青枯菌致病性的方法主要有TTC平板鉴定、组培苗或盆栽苗感染试验、TTC平板只能对青枯菌的致病强度进行步鉴定，不能定量，更不能将群体中不同致病强度的青枯菌进行分离；而组培苗感染实验或间实验耗时费力本研究根据不同致病强度青枯菌细胞表面特性的差异，，为研究生防菌的致弱效果、快速筛选高效稳定的生防菌奠定了良好的基础研究的多样性对于了解青枯病的发生和流行具有十分重要的意义 4.1、研究开发方案和技术路线 4.2、拟采用的方法 4.2.1、青枯雷尔氏缓冲液pH的确定。缓冲液的pHpH的缓青枯雷尔氏青枯雷尔氏青枯雷尔氏菌活化培养基：TTC培养基：