分子信标技术时定量检测端粒酶活性的研讨.pdfVIP

摘要 本论文致力于运用分子信标技术，对广谱恶性肿瘤标志物—端粒酶活性的进行实 时定量检测的方法研究。开发了两类新型探针引物，建立了五种实时定量检测端粒酶 活性的方法。并以合成的寡核苷酸或恶性肿瘤细胞提取液为检测对象，对上述方法的 检测效果进行了评估。全文共分五章： 1．绪论部分对分子信标技术、端粒酶及其活性检测方法进行了评述，同时指出本 论文的设计思路及创新之处。 2．针对端粒酶延伸产物序列的特殊性，开发了一类探针引物一复合式蝎形引物。 并以合成的寡核苷酸代表端粒酶延伸产物，对其进行了实时定量检测。 3．选择了两种最具代表性的端粒酶活性检测方法，用复合式蝎形引物代替原方法 中的上游引物，建立了两种实时定量检测细胞中端粒酶活性的新方法。 4．针对端粒酶活性检测需要“热启动”的特点，开发了两类新型引物—发夹型引 物和锚式发夹型引物。同时，与复合式蝎形引物一起，建立了两种实时定量检测细胞 中端粒酶活性的快速方法，该法可在双温快循环PCR条件下完成检测。 5．开发了一类单标记、发夹结构的荧光引物。建立了荧光引物实时定量检测细胞 中端粒酶活性的新方法。 最后，从探针的特异性、定量的线性范围、反应时间及试剂的成本等方面对上 述五种方法及文献报道的方法进行了比较。 关键词：分子信标技术，端粒酶活性检测，复合式蝎形引物，荧光引物，发夹型引物， 锚式发夹型引物 Abstract The Oll thesisfocusesreal-time detectionofextensivetumor quantitative predictive marker-telomernse molecularbeacon twonovel activity technology．The using andfivenew for detectionof probe-primer methodsreal-time telomerase quantitative are oftumorcellsas serialdilutionsoftheextraction activitydeveloped．Using targets，the made detectioneffectsofthesemethodsare is of5 discussed．Thisthesis up chapters．and thecontentsas arefollows： 1．Thereviewis oilmolecularbeacon andmethods presented technology，telomerase forits discussed． andtheir are activity，theiradvantagesdisadvantages to telomerase