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DAZ基因外显子与无精子症的关系 作者：王恒才 路西兰 侯孟彦 张迎春 王红霞 张意茗 【摘要】 目的 探讨Y染色体无精子缺失(DAZ)基因外显子与无精子症的关系。方法 应用多重聚合酶链反应(PCR)技术对97例无精子症病人和60例正常生育男性DAZ基因外显子进行检测。结果 97例无精子症病人DAZ基因外显子缺失4例,缺失率4.12%，正常生育男性DAZ外显子未检测到缺失。结论 DAZ基因外显子缺失可导致无精子症;检测不育病人是否有Y 染色体微缺失，对于通过辅助生殖技术(ART) 将这种基因缺陷遗传给下一代的可能性评估具有重要意义。 【关键词】 少精子症;Y染色体;DAZ外显子;聚合酶链反应;不育,男(雄)性 [ABSTRACT] Objective To explore the relationship between DAZ exon in Y chromosome and azoospermia. MethodsDAZ exons were detected by polymerase chain reactions (PCR) in 97 patients with azoospermia and 60 normal men. Results Of 97 patients, DAZ exon deletion was found in four (4.12%). However, DAZ exon deletion was not found in the healthy subjects. Conclusion Deletion of DAZ exon may result in azoospermia. A detection of whether an infertile patient is suffering from Y microdeletion is of great importance to assess the possibility of descending this gene defect to offspring through assisted reproductive technology. 　　[KEY WORDS] oligospermia; Y chromosome; DAZ exon; polymerase chain reaction; infertility, male 　　Y染色体对性发育和精子发生是必需的,Y染色体上特殊基因的缺失、点突变和微重排等异常均可影响男性生精功能。为了明确Y染色体AZFc区无精子缺失(DAZ)基因外显子与无精子症的关系，本研究对97例无精子症病人和60例正常生育男性的DAZ基因6个外显子进行检测，现将结果报告如下。 　　1 对象与方法 　　1.1 对象 　　2005年1月—2008年3月，我科收治男性不育、无精子症病人97例，病人平均年龄26.9岁。病人的精液标本经过离心后显微镜检查，共3次，每次检查间隔7～21 d，均没有发现精子，符合世界卫生组织的诊断标准。通过临床检查、性激素检测等排除精索静脉曲张、附睾损伤、阻塞性无精子症或其他泌尿生殖系统疾患。正常生育男性(对照组)60例，均有生育史，精液检查2次均正常。经知情同意后，抽取外周血液提取基因组DNA。1.2 方法 　　1.2.1 试剂 基因组DNA抽提试剂盒由上海生工公司出品(Cat. No. SK1251);Taq酶、dNTP购自大连宝生物公司;红细胞裂解液为本实验室自制。 　　1.2.2 外周血基因组DNA提取 采用常规酚氯仿法抽提。 　　1.2.3 PCR引物设计 主要检测DAZ 1～4基因编码重要功能区片段外显子1～6的区域， DAZ1、DAZ2/3、DAZ4/5、DAZ6四对引物由Invitrogen公司合成。引物序列见表1。 　　1.2.4 PCR反应 PCR体系和反应条件按照文献及引物、目的片段长度等情况决定。PCR 反应体积为50 μL,含有1.5 mmol/L MgCl2, 10 mmol/L TrisHCl(pH 8.0),50 mmol/L KCl，200 μmol/L dNTP，Taq DNA聚合酶1 U。PCR 反应参数为94 ℃预变性4 min后，94 ℃ 30 s，58 ℃ 45 s，72 ℃ 45 s，共完成35个循环，最后72 ℃延伸3 min,然后置4 ℃保温。产物用10 g/L琼脂糖凝胶电泳,60 V恒压电泳30 min，溴乙锭染色后在紫外线灯下观察结果,并照相保存。为排除假阳性反应，对微缺失的标本进行3次PCR 重复检测, 上述缺失仍无扩增信号,则证实微缺失的存在。　表1 DAZ外显子缺失检测的PCR引物序列引物 上游