不育男性精子父系及母系印记基因甲基化状态的初步分析-preliminary analysis of methylation status of male and female imprinted genes in infertile mens sperm.docxVIP

2) 对基因组 DNA 行亚硫酸氢盐处理，随后行半巢式 PCR 或 PCR 反应。3) 将 PCR 产物进行纯化，与 pCR?2.1-TOPO?载体连接及转化，并行菌液 PCR 鉴定阳性克隆。4) 每例标本送 15-20 个阳性克隆菌液进行测序，用 Vector NTI Suite 8 软件对测序结果进行序列分析。5)根据测序结果，挑选出 H19 基因 7 号、9 号 CpG 位点,SNRPN 基因 16号 CpG 位点甲基化及未甲基化的克隆，提取质粒 DNA 并行 PCR 反应。 6) H19 7 号 CpG 位点及 SNRPN 16 号 CpG 位点用 HhaⅠ进行酶切。H19 9 号CpG 位点用 TaqⅠ进行酶切，电泳鉴定酶切结果。 7) 采用 SPSS 16.0 软件进行统计学分析【结果】1) 各组 H19 基因大多数为甲基化状态，有散在的 CpG 位点未甲基化，但未 出现 CpG 位点低甲基化及完全未甲基化。严重弱精子症组中有一个克隆 出现8个 CpG 位点未甲基化，但尚不能达到低甲基化标准（＞9 个 CpG 位点呈未甲基化）。2) 各组 SNRPN 基因则与 H19 基因相反，大多数为未甲基化状态，有散在的 CpG 位点甲基化。正常精液组中有一个克隆出现 20 个 CpG 位点呈甲基 化的高甲基化状态（＞11 个 CpG 位点呈甲基化），其余克隆未见 CpG 位 点的