免疫定性项目性能验证 ppt课件.ppt

* 人员比对操作步骤 持续时间：10～20天。 测定批数：20 结果计算及判断：人员之间的阳性和阴性检测符合率；比较人员间室内质控样本检测的批间变异（CV%）。可选择1份弱阳性样本重复检测20孔，以观察不同操作者的批内变异的差异。 不同操作者的批间变异，还可通过在实际工作中定期分析总结进行。 6.影响检验结果的要素 人员 设施和环境条件 实验室设备 温湿度控制 培训、比对 设备操作、校准 内部质量控制 操作规程 试剂 性能验证 SOP文件 室内质控程序 四. 对开展性能验证的看法 要做！ 怎么做：按照制定的SOP做！ 怎么写SOP：参照标准的方法写，但可以适当简化！ 一个标准：以满足临床需求为前提！以临床医生满意为前提！  谢 谢！ * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 批间重复性的验证 高、中、低三个浓度的样本，在10天以上时间内单次（孔或管）重复进行20批检测，计算所得S/CO值的均值和SD，计算批间CV%。 判断结论：应≤试剂说明书所标明的批间变异。 ELISA的批间变异CV%应≤15%。 3. 敏感性 1）验证方法: 取10-20份已知真阳性的样本，用常规检测方法检测，计算检测阳性的样本占样本总数的比例。 2）样本来源: 临床诊断的阳性病人血清； 厂家提供的阳性对照； 决定性参考方法检测阳性的样本； 以上阳性样本来源紧张时，可以进行稀释（如2：3，3：4这样稀释） 4. 特异性 1）验证方法：选取20份正常健康人血清（一般取自健康体检者），计算其检测阴性结果所占百分率。 2）样本来源:体检样本,体检者确认符合要求后即可. NOTE:部分项目在健康体检人群中阳性率也很高,此类项目特异性验证很难执行,建议引用厂家说明书. 比如麻疹病毒IgG,CP-IgG,MP-IgG等一系列病毒抗体IgG.因为很难确认体检者既往是否有过感染史,而IgG抗体在体内存留时间长.因此很难收集到真正意义上的阴性样本. 特异性验证（干扰） 特定病原体以外感染性疾病患者的样本。 含有干扰性物质的样本：类风湿因子（RF）阳性、含异嗜性抗体、溶血、脂血、高胆红素样本。 结果判断：非特定病原体感染患者样本均应为阴性。含一定浓度干扰物质的样本检测应为阴性。 5. CUT-OFF重复性和测定下限验证 CUT-OFF重复性验证：样本浓度应接近临界值。不宜用阴性或强阳性样本。 批内和批间变异验证：高、中和低三个浓度（与试剂盒说明书中所述相适应） 临界点的定义 同样一份样本，在多次重复实验中各有50%的几率获得阳性或阴性的结果时该分析物的浓度。 CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline 临界点（CUT-OFF)与试剂盒判断值（CUT-OFF值）的区别 这里的临界点指的是一个处于试剂检测临界点的样本浓度，其一旦确定，是不变的。 试剂盒CUT-OFF值指的是一个判断某一次测定结果的由阴性和阳性对照信号值按一定公式计算出来的信号值，每次测定都会有所差异。 (1) CUT-OFF重复性验证 CUT-OFF的重复性（同时包含测定下限 的验证） 批内变异的验证 批间变异的验证 验证步骤 制备足够40次重复检测的3份样本：分别为处于临界浓度、高于临界浓度20%和低于临界浓度20%的样本。 重复检测样本40次，确定每一份样本结果为阳性和阴性的百分比。 评价临界浓度是否准确？评价+20至-20%的浓度范围是否包含于、位于或者超出这种方法的95%区间？ CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline C50是否准确？ 40次测试 C50 1 阳性结果 =13/40(32.5%) 不正确 =27/40(67.5%) 2 阳性结果 （14-26）/40（35%-65%） 正确 阳性结果 重复性检测总次数 次数 百分比 真正百分比 样本的实际浓度 20 10 50% 30%-70% C30-C70 40 20 50% 35%-65% 100 50 50% 40%-60% 不同C50重复检测次数与检出阳性数的关系 临界点（CUT-OFF）的重复性指的是什么？ 是为正在评价的检测试剂或系统建立分析物的临界浓度(C50)，并且确保临界浓度±20%的范围处于95%区间内。 CLSI