微生物检验_第九章 分枝放线菌ppt课件.pptVIP

分枝杆菌放线菌诺卡菌;Mycobacterium是一类细长略带弯曲的杆菌，含有分枝菌酸，有分枝生长的趋势而得名。具有抗酸性，故又称抗酸杆菌(acid-fast bacillus)。;第一节 结核分枝杆菌;荚膜： CR3结合、降解大分子物质、保护、 抑制溶酶体融合 脂质： 索状因子、磷脂、硫酸脑苷脂、蜡质D 蛋白质: 超敏反应、结核结节的形成 传播途径：呼吸道、消化道、损伤的皮肤 疾病：多种脏器的结核病，肺结核最为多见。 ;免疫性： 高感染率，低发病率。 抗体无保护作用 带菌免疫 细胞免疫 ;结核分枝杆菌不发酵糖类，有毒株中性红试验均阳性，无毒株则为阴性，并失去索状生长现象。;（1）Direct Smear ;（2）浓缩集菌涂片检查法 如果直接涂片镜检不易检出结核杆菌，应采用浓缩集菌涂片检查法，以提高结核杆菌的检出率。将标本离心，取沉淀涂片，或采用漂浮集菌法，集菌后标本经反复多次使涂层加厚，一般取3~4个接种环，干燥固定后染色镜检。;3.核酸检测 用PCR法快速诊断结核分枝杆菌感染,特异性与敏感性均大于95％。 ４.抗原检测：用ELISA法检测结核分枝杆菌抗原，可快速得知是否感染结核分枝杆菌． ５.抗PPDIgG的检测 用ELISA法检测患者血清中抗PPDIgG，可作为活动性结核分枝杆菌感染的快速诊断方法，阳性率为80％～90％。;６.分离培养 专性需氧、罗氏培养基、8w 　; 无菌毛细管吸取消化后标本0.1ml，滴加于中性罗氏培养基，将接种过的斜面来回晃动，使菌液均匀铺于斜面上，斜面朝上放37℃恒温箱内培养。每一标本同时接种2支。 接种后第一周每天观察一次，此后每周观察一次。阳性结果经涂片证实随时报告。若7天内报告阳性，则为快速生长菌，超过7日则为缓慢生长菌。阴性结果至8周报告。必要时可延长。 ;７.鉴定 (1)PCR反向膜探针杂交E LISA法(PCR杂交梳) (2)DNA探针 (3)16s rRNA基因序列测定 (4)高效液相色谱(HPLC)检测 ;８.药物敏感性试验 将纯培养物菌悬液，接种含各种浓度药物的固体培养基上，同时做不含药物的对照组。经过培养，含有药物的培养基上菌落数目是对照组的75％以上，则认为该菌对该药物浓度为完全耐药，如无菌落生长则为敏感。 ;四、免疫学诊断; 应用： ①选择BCG接种对象及测定接种效果，结核菌素反应阴性者应接种BCG； ②结核菌素试验对婴幼儿可做诊断结核病之用； ③在末接种BCG的人群中作结核分枝杆菌感染的流行病学调查； ④可借用其测定肿瘤病人的细胞免疫功能。;2、结核分枝杆菌抗原检测 3、结核分支杆菌抗体检测 4、全血干扰素释放试验 ESAT、CFP-10;第二节 非典型分枝杆菌;特点;—、光产色分枝杆菌;二、暗产色分枝杆菌;三、不产色分枝杆菌;四、迅速生长分枝杆菌;第三节 麻风分枝杆菌; 抗酸杆菌，呈束状或团状排列， G+无鞭毛、荚膜和芽胞。麻风分枝杆菌为典型的胞内寄生菌，有该菌存在的细胞胞质呈泡沫状称麻风细胞．用药后细菌可断裂为颗粒状、链杆状等，着色不均匀，叫做不完全菌。 ;微生物学检验;放线菌属与诺卡菌属; 主要致病菌——衣氏放线菌（A. israelii) 属于正常菌群。在机体抵抗力减弱、口腔卫生不良、拔牙或外伤时引起内源性感染，导致软组织的化脓性炎症。若无继发感染则大多呈慢性无痛性过程，并常伴有多发性瘘管形成，排出黄色硫磺样颗粒，此即为放线菌病。最为常见的是面颈部感染。 ;致病性与免疫性; G+、非抗酸性丝状菌 培养困难，厌氧或微需氧 硫磺样颗粒（菌落） 压片或组织切片，显微镜下可见颗粒呈菊花状 ;硫磺样颗粒(sulfur granule);培养：厌氧或微需氧 气体环境：5％ CO2 营养培养基：脑心浸液琼脂平板 温度与时间：37℃，24～48h 菌落:灰白色蜘蛛状、不规则结节状或臼齿状菌落, 初分离(粗糙) 生化特性:溶血(-) 葡萄糖(+) 甘露醇(+) 吲哚(-) 过氧化氢酶试验(-) ;微生物学检查 主要：硫磺样颗粒（脓汁,痰,分泌物） 有颗粒：压片镜检:菊花状排列的菌丝 无颗粒：分枝菌丝，断裂的菌细胞 必要：厌氧培养（缓慢，37℃培养2w以上） ;诺卡菌属;生物学性状;营养要求：不高（沙氏或普通琼脂培养基） 气体环境：需氧，有气生菌丝 培养温度：室温或37℃ 生长速度：缓慢生长，约1周 色素：星形诺卡菌：黄色或深橙色，无白色菌丝