第八讲 基因表达及其调控.pptVIP

第五讲 基因表达及其调控 一 复制及其调控 起始 空间 时间 机制 延伸 双向 不对称 不同功能的聚合酶 终止 特异 非特异 端粒酶 复制的调控 复制工厂 细胞周期的控制 DNA损伤与修复 1 起始的空间 起始序列:核心序列和辅助序列 遗传起始点(Genetic origin) 顺式作用序列(cis-acting sequences)---与DNA复制起始蛋白相识别的A/T区(ORE) 功能起始点(Functional origins) DNA合成开始时的实际位点(ARS, Autonomously Replication Sequence) 起始序列 遗传起始点 功能起始点 其功能依赖于:1)周边环境;2)各功能起始点间的相互作用 当环境条件时,功能起始点数目也改变 对于简单基因组(细菌,病毒) 遗传起始点=功能起始点 对于复杂基因组(酵母,哺乳动物) 遗传起始点≠功能起始点 酵母的复制起始点 在野生型酵母中,有9个遗传起始点,但只有3个作为功能起始点发挥作用,其余的处于”沉默”状态。 在酵母基因组中已找到429个功能起始点 哺乳动物的复制起始点 在动物细胞中已找到23个功能起始点 未找到遗传起始点 复制与染色体的性质相关 2 起始的时间 染色体的不同区域的复制是在S期内不同时间进行的。 染色体的结构 起始点的结构 转录活性 蛋白激酶 常染色质的复制早于异染色质 常染色质：结构松散，基因多，转录旺盛 异染色质：结构紧密，基因少，转录少 转录帮助了复制，复制早的有利于转录。（ARS的辅助序列是转录因子结合部位。由于转录因子的结合，使DNA链容易打开，从而起始复制。） CDKs在时间上调控ARS 3 起始机制 特定序列（cis-acting elememts) 特定蛋白质(trans-acting factors) 多步骤 依赖ATP 有时间和空间的调控 大肠杆菌中的复制起始 酵母细胞中的复制起始 1 延伸方式---尾的结合 底物dNTP中，由于在5’端带上了能量，使分子具有方向性。 一个DNA模板只能复制/转录一条DNA/RNA链，不允许掺入单体错误。一旦错误发生，就要切掉。由于掺入时用的是单体的能量，所以切掉链上的核苷酸不会影响新单体的掺入。 2 滞后链的合成方式 由于模板链的反向性，而两条链的DNA聚合酶都只能沿复制叉向一个方向移动，所以滞后链需要在酶上发生回旋。 3 Okazaki 片段的连接 1 端粒 保护染色体不受核酸酶的攻击 提供了染色体在核中定位的空间信息 提供染色体末端的复制方式 端粒长度是控制细胞衰老的“分子钟” 端粒与滞后链 2 端粒酶 一种核糖核酸酶，内含一段RNA序列，并且有一部分是与端粒序列互补的，使模板的3’端依据这段RNA序列进行复制延伸，提供滞后链回旋时所需的长度，并完成滞后链5’端的合成。 端粒酶的作用过程 1 复制工厂（ Replication Factory ，RF） 参与复制/转录的蛋白质组成的复合体是固定在核基质和骨架上的，复制/转录发生时，它们将DNA模板卷进去，排出新合成的子代DNA/RNA分子。 这些复合体组成一个类似工厂的结构，每个工厂可同时完成多个复制/转录单位。 实验1 DNA聚合酶不动，而是DNA链在移动 实验证明2 集合：聚合酶集合在某个区域 运动：该处的复制叉不断增多和减少 RF与核结构 在细胞核中，各染色体不是杂乱地在一起，而是每条染色体有特定的空间定位。折叠后的染色体定位在核基质上。 核基质是RF的组织者 2 细胞周期调控与DNA复制 在细胞周期中DNA只能复制一次 MCM蛋白（微型染色体蛋白） 在细胞中存在一种因子，在复制未开始时，该因子结合在染色体上，一旦DNA复制开始，，该因子失活。所以DNA完成一次复制后，就不会再进入下一次复制。 CDK阻止DNA的再次复制 3 复制与DNA损伤 1) DNA聚合酶（DNA polymerases) (1): 错误率～10–5 2) 校正错配（proofreading）: (1) + (2): 错误率～ 10–7 3) 错配修复（Mismatch repair，MMR) (1) + (2) + (3): 错误率 ～ 10–10 proofreading Mismatch repair 模板链的甲基化 4 细胞周期的质量监控 监测的分子机制 （五） DNA损伤及修复 DNA结构的改变将导致相应蛋白质一级结构（氨基酸顺序）的变化，从而引起生物特征或性状发生变异。 DNA分子中碱基互变异构: DNA分子的碱基，存在酮式—烯醇式或氨式—亚胺式互变异构。不同的互变异构体形成氢键的方向和能力不同，有可能导致复制时出现错误。转换与颠