温自家抗体的血清学检测.pptVIP

温自家抗体的血清学检测 北京市红十字血液中心 范道旺 溶血性贫血的分类 自家免疫性溶血性贫血 药物诱导免疫性溶血性贫血 同种免疫引起的免疫性溶血性贫血 新生儿溶血 溶血性输血反应 自家免疫性溶血性贫血 溶血类型： 所占比例（%） 温自家溶血性贫血（WAIHA） 48~70 冷凝集素病（CHD) 16~32 混合型（即温型和冷型并发） 7~8 突发性冷型血红蛋白尿症（PCH) 2，主要见于 儿童 DAT-阴性溶血性贫血 12~18 检测温自身抗体的目的 用于确定： 是否有温自身抗体致敏在患者自身红细胞上 患者血清中是否存在温自身抗体 患者血清中是否同时存在同种抗体 据报道：15~40%的有免疫史的WAIHA患者血清中伴随有同种抗体。 温自身抗体引发的血清学问题 ABO定型 Rh定型 DAT试验 抗体筛查及抗体鉴定 自身抗体的评价 同种抗体的筛查和鉴定 自家凝集导致的ABO正反定型不相符 正定（抗体血清） 反定（试剂红细胞） 抗-A 抗-B 抗-D 阴性对照 A细胞 B细胞 w+ w+ 3+ w+ 4+ 4+ 对于极端的个例，包被了大量的IgG抗体红细胞在定型血清中会发生自发的凝集，使用试剂的稀释液作为阴性对照，可以发现出现弱的自发凝集产生的阳性反应，从而干扰定型。 一般而言，由于温自身抗体属于不完全抗体，即使包被大量此抗体的红细胞，正定型时与抗-A或抗-B混合后，也不会自发凝集。同样，反定型时血清中的温自身抗体和反定型红细胞在室温盐水介质也不产生凝集反应。 WAIHA患者的Rh定型 由于盐水介质抗-D试剂中添加了增强剂，因此，容易导致包被温自身抗体的D（-）红细胞自发凝集，产生假阳性，因此必须要用试剂厂商的试剂稀释液做阴性对照。只有阴性对照为阴性时结果才可靠(在订购试剂时要含有阴性对照）。 红细胞包被的IgG抗体不能通过洗涤而除去，因此，为了准确定型，必须采用放散的方法来除去包被在红细胞上的IgG抗体，得到DAT阴性的红细胞来定型。 DAT阴性红细胞的制备 甘氨酸-EDTA法 二磷酸氯喹法 甘氨酸-EDTA法去除IgG抗体（1） 试剂： 10% Na2EDTA 0.1 M 甘氨酸-HCl缓冲液（pH 1.5): 0.75g甘氨酸溶于100ml生理盐水，用浓盐酸调节pH到1.5 1.0 M Tris-NaCl: 12.1g tris 和5.25g NaCl溶于100ml蒸馏水。 甘氨酸-EDTA法去除IgG抗体（2） 方法： 待处理红细胞盐水洗涤6次 酸化-甘氨酸-EDTA液：甘氨酸-HCl和EDTA按照20：5的体积比混合。 在试管中将红细胞和酸化-甘氨酸-EDTA液按照10：20体积比充分混合，室温孵育2~3分钟。 向试管中添加1体积的Tris-NaCl, 混匀后于900-1000g离心1分钟，弃上清液，盐水洗涤红细胞4次。 用抗-IgG检测洗涤后的红细胞，确认DAT阴性，表明包被在红细胞上的IgG抗体已经去除。 氯喹放散法（1） 试剂： 二磷酸氯喹：20g二磷酸氯喹溶于100ml盐水，用1N NaOH调节pH到5.1。 DAT阳性的红细胞（包被IgG） 对照细胞（已知部分血型） 抗-IgG血清 氯喹放散法（2） 方法： 0.2ml盐水洗涤的压积红细胞和0.8ml氯喹液混合。室温放置30分钟。同时做对照。 取出部分细胞，盐水洗涤4次，进行DAT试验，如果DAT为阴性，则放散完成，将全部处理后的细胞洗涤备用。否则继续处理30分钟后检测。 WAIHA的DAT 单纯IgG抗体引起 20~ 66% IgG+C3 24~63% 单纯C3 7~14% 极少数：IgA或温反应性IgM抗体 温自身抗体DAT反应结果 多特异性AHG 3+ ~