考马斯亮蓝染色法观察细胞微丝.pptVIP

XI. Observation on cytoskeleton A、dye by Coomassie blue  【Purpose】 掌握用考马斯亮蓝（Coomassie blue） R250染色法观察植物细胞骨架的方法。 【Principle】 细胞骨架(Cytoskeleton) 组成：主要包括微管、微丝和中间纤维以及核骨架-核纤层体系。微管主要分布在核周围，呈放射状向四周扩散，微丝主要分布于细胞质膜的内侧，而中间纤维则分布在整个细胞中。 细胞骨架作用：具有维持细胞形态结构和内部结构的有序性、参与细胞运动、物质运输、能量转换、信息传递和细胞分裂等重要功能。 细胞骨架的研究方法：考马斯亮兰R250染色法、荧光素标记的鬼笔环肽染色法、间接免疫荧光法等。 考马斯亮兰R250染色法的原理：考马斯亮蓝R250可以对各种蛋白质进行染色。细胞骨架有一个特性，即用非离子去垢剂（如Triton X-100）处理时，可以保持非溶解状态。当用这类试剂处理细胞时，细胞内其它可溶性的物质和膜成分都被抽提出来，只留下细胞骨架。考马斯亮蓝R250虽不能对微丝进行特异性染色，但当其它蛋白成分被抽提后，就能清晰地显示微丝束的形态。 [Apparatus, material and reagent] 光学显微镜；烧杯、吸管、镊子、玻片染色缸、载玻片、盖玻片； 新鲜洋葱鳞茎; 6mM磷酸盐缓冲液（