定量PC的新技术.docVIP

欢迎光临fangsheke66豆丁文档定量 HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR的新技术real-timeimmuno- HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR： 1992年，Sano等人将免疫测定技术与 HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR结合，创建了一种全新的极其敏感的抗原分子检测技术，即免疫- HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR（Immuno- HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR），随着这种技术的不断发展，2000年，Sim等使用荧光定量 HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR代替普通 HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR，发展了免疫定量 HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR技术（real-timeimmuno- HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR）。该技术把抗原抗体反应的高特异性和聚合酶链反应的高敏感性有机结合起来，其本质是一种以 HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR扩增一段DNA报告分子代替酶反应来放大抗原抗体结合率的一种改良型ELISA。 1real-timeimmuno- HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR的基本原理  real-timeimmuno- HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR主要由两个部分组成。第一部分是类似于普通酶联免疫吸附实验（ELISA）的抗原抗体反应。第二部分即荧光定量 HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR。real-timeimmuno- HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR与ELISA的区别就在于ELISA是以碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶来标记抗体，用颜色反应来表明阳性或阴性结果，而前者是以一段特定的双链或单链DNA来标记抗体，用 HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR扩增抗体所连接的DNA，因此可由 HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR产物的量来反映抗原分子的量。由于荧光定量 HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR的高灵敏度，只要存在着极微量的抗原抗体反应，都能被检测到。real-timeimmuno- HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR的关键之处就在于用一个连接分子将一段特定的DNA连接到抗体上，在抗原和DNA之间建立相对应关系，从而将对蛋白质的定量检测转变为对核酸的定量检测。 2real-timeimmuno- HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR体系的组成  免疫 HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR体系由待检抗原，特异性抗体，连接分子，DNA和 HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR扩增系统组成。  1．待检抗原被检测的样品可以是抗原，或者是作为抗原的某种抗体。待检的抗原可以直接吸附于固相，这一过程与ELISA试验是相同的，因此有些吸附性差的抗原不能应用目前介绍的免疫 HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR方法进行检测，需要对免疫 HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR进行改进，以便能够检测吸附性差的抗原。免疫 HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR的后续过程需 HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR扩增，目前有些方法应用的固相板或管是专门用于免疫 HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR，并且有些 HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR仅可以直接用微量板进行扩增，这样可以简化实验过程和提高检测的精确性。免疫 HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR具有非常高的敏感性，特别适用于检测微量抗原。  2．特异抗体免疫 HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR中的特异性是对应于待测抗原，与ELISA一样，抗体的特异性和亲和力将影响免疫 HYPERLINK /html/PCR/index.html PCR的特异性和敏感性。一般均选用单抗体，这个抗体常采用生物素标记