第七章 蛋质组学1.pptVIP

（二）蛋白质相互作用研究技术 生命的基本过程是不同功能蛋白质在时空上有序和协同作用 新陈代谢以蛋白质复合体或多蛋白质网络协同作用实现 细胞信号转导及病原体感染和免疫反应 1．酵母双杂交系统 （yeast two-hybrid system） 2．噬菌体表面显示技术 ( phage display ) 3．基于质谱的蛋白质相互作用研究方法 靶蛋白制备 蛋白质复合体的纯化 蛋白质复合体的质谱鉴定 基本步骤： （1）亲和层析耦联质谱技术 基本原理：将某种蛋白质以共价键固定在基质（如琼脂糖）上，含有与之相互作用的蛋白质的细胞裂解液过柱，先用低盐溶液洗脱下未结合的蛋白质，然后用高盐溶液或SDS溶液洗脱结合在柱子上的蛋白质，最后用多维液相色谱耦联质谱技术（MDLC-ESI-MS/MS）鉴定靶蛋白的结合蛋白。 先决条件 得到足够多的保持生物活性的重组靶蛋白作为诱饵（bait） 获得足够量、纯度高的与诱饵相互作用的蛋白质 利用含靶蛋白的融合蛋白获得相互作用蛋白质 谷胱甘肽S转移酶（glutathione S-transferase，GST）融合蛋白 蛋白A融合蛋白 主要优点 灵敏度高：高浓度靶蛋白 候选蛋白质与靶蛋白的结合机会均等 检测多亚基蛋白质之间的相互作用 （2）免疫共沉淀耦联质谱技术 原理：以细胞内源性靶蛋白为诱饵，用抗靶蛋白抗体