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?1、直接凝集 ①玻片凝集:定性实验,已知Ab测未知Ag 用于细菌和血型鉴定 玻片凝集反应是在玻片上将抗体直接与颗粒性抗原物质(如细菌、红细胞等)混合,在有适当电解质存在的条件下,如两者对应便发生特异性结合而形成肉眼可见的凝集物,即为阳性;如两者不对应便无凝集物出现,即为阴性。 ②试管凝集试验:半定量实验 已知Ag定量测Ab 用已知的定量的颗粒性Ag悬液直接与系列稀释的待检血清(Ab)在试管内混合,经一定时间后,观察各管有无凝集,并根据凝集程度定量测定血清中的Ab水平及其效价。 ? 试管凝集试验 管号 1 2 3 4 5 6 7 盐水(mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 血清(mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 弃 0 抗原(mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 终体积(mL) 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 稀释度 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 盐水对照? 结果 ++++ +++ ++ ++ + - - ? ?效价—— 能与定量Ag产生明显凝集现象(++)的血清 最高稀释倍数 。 2、间接凝集 将可溶性Ag(或Ab)包被在惰性颗粒载体(红细胞、乳胶颗粒等)表面,再与相应Ab(或Ag)反应,出现颗粒物凝集的现象。 (二)沉淀反应 定义:可溶性Ag(如血清蛋白、细胞裂解液或 组织液等)与相应Ab特异性结合,在一定条件下,出现肉眼可见的沉淀物现象。 方法: 环状沉淀 絮状沉淀 免疫比浊 琼脂凝胶扩散: ①单向免疫扩散 ②双向免疫扩散 ③对流免疫电泳 ④火箭电泳 ⑤免疫电泳 ①单向免疫扩散 [原理] 将某种特异性Ab混合于琼脂凝胶中,制成含Ab的琼脂板,再于琼脂板上打孔,并将一定量的Ag加入孔中。 Ag在孔中向四周作辐射状扩散,如Ag与已知的Ab相对应,在两者比例适合处出现由免疫复合物所形成的白色沉淀环。 沉淀环直径的大小与Ag的含量成正比。以不同浓度的标准Ag与固定浓度的Ab抗体反应后测得沉淀环的直径作为横坐标,以Ag浓度为纵坐标可绘制标准曲线。根据待测样本沉淀环的大小,从标准曲线中即可推算其含量。主要用于定量测定抗原或IgG、 IgM、 IgA。 ②双向免疫扩散 [原理] 将可溶性Ag和Ab分别加到琼脂板上相应的小孔中,使两者各自向四周扩散,若Ag与Ab相对应,两者相遇即发生特异性结合,并在比例适合处形成白色沉淀线。每一对应Ag和Ab可出现一条沉淀线,根据沉淀线的有无、位置、形状以及对比关系,可分析Ag或Ab成分。 ??????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? 双向扩散示 ④火箭电泳 [原理] 火箭电泳是单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测Ag的技术。在含已知Ab琼脂中打孔,再加
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