痰瘀同治方对痰瘀互结证冠心病小型猪心肌组织保护作用.docVIP

痰瘀同治方对痰瘀互结证冠心病小型猪心肌组织保护作用 　　[摘要] 目的：观察痰瘀同治方对痰瘀互结证冠心病小型猪心肌组织的保护作用。方法：将36只中国小型猪随机分为正常对照组、模型组、丹蒌片组和痰瘀同治方高、中、低剂量组（生药2.0，1.0，0.5 g?kg-1），每组6只；除对照组外，其他各组高脂饲料喂养 2周后，采用介入技术球囊损伤冠状动脉左前降支内皮，术后继续高脂饲料喂养8周，制备小型猪冠心病痰瘀互结证模型；术后给药8周，分别于0周（实验前）、高脂2周（术前或给药前）、高脂6周（给药后4周）、高脂10周（给药后8周），观察各组动物血清超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量；同时实验结束后进行心肌酶谱检测和HE染色病理观察，采用透射电子显微镜观察心肌细胞超微结构的改变。结果：与对照组比较，模型组自第2周起至实验结束，血清SOD活性明显下降，而MDA含量明显上升（P　　[关键词] 痰瘀同治方；痰瘀互结证；冠心病；小型猪；心脏保护 　　冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）是由于冠状动脉粥样硬化斑块形成导致血管管腔狭窄、甚至阻塞，冠状动脉血流量减少，心肌组织氧供失衡，从而引发心绞痛、心肌梗死等临床综合征，属于中医“胸痹、心痛、真心痛”的范畴。痰瘀互结是冠心病主要的病因病机。因此痰瘀同治法是治疗冠心病的常用治法。临床研究证实采用痰瘀同治法治疗冠心病能够明显减轻心肌缺血症状[1]。痰瘀同治方由丹参、川芎、人参等多味中药组成，具有活血化瘀、祛痰行气的功效，尽管在前期组方研究中证实其能够有效的减轻冠脉结扎导致的大鼠急性心肌缺血程度，但是在辨证思治理论指导下，针对痰瘀互结证冠心病动物模型的心肌保护作用研究还未有可靠的研究结果。本研究采用高脂饲料喂养复合冠状动脉损伤的方法建立痰瘀互结证冠心病小型猪模型，观察痰瘀同治方对缺血心肌组织的保护作用，为其临床研究提供重要的实验参考。 　　1 材料 　　1.1 动物 中国实验小型猪（Chinese experimental miniature swine，CEMS），36只，雌雄不拘，体重15～20 kg，由北京北七家美乐养殖场提供，动物合格证号SCXK（京）2013-0005。 　　1.2 药物与试剂 痰瘀同治方（TYTZ），主要由丹参、川芎、人参等中药组成，由中国中医科学院西苑医院基础医学研究所提供。丹蒌片，0.3 g/片，由吉林康乃尔药业有限公司生产，批 戊巴比妥钠，德国进口分装，北京化学试剂公司提供，批号020402；76%复方泛影葡胺注射液，上海旭东海普药业有限公司生产，批号071101；肌酸激酶（creatine kinase，CK），乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）测定试剂盒，均由日本和光纯药工业株式会社提供，批号104805和104802；肌酸激酶MB（creatine kinase-MB，CK-MB）测定试剂盒，由四川迈克科技股份有限公司提供，批号110105。血清超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）检测试剂盒，由南京建成生物工程研究所提供，批号分别20110428；高脂饲料配方：每100 kg高脂饲料中含：胆固醇2 kg，胆盐0.5 kg，猪油10 kg，由北京科澳协力饲料有限公司提供，许可证号SCXK（京）2009-0012。 　　1.3 仪器 MP150多导生理信息分析系统（美国Biopac公司）；BV Pulsera型C型臂X光机（荷兰飞利浦公司）；RA-1000全自动生化分析仪（美国TECHNICON公司）；快速交换PTCA球囊扩张导管（管径=1.3∶1，美国Boston公司）；导引导丝，6F Cordis血管造影导管和球囊均由美国Abbott公司提供；ICE-CL31R低温离心机（美国Thermo公司）；BH-2显微镜（日本OLYMPUS）；H7500 型透射电子显微镜（日本日立公司）。 　　2 方法 　　2.1 痰瘀互结证冠心病小型猪模型的建立 采用高脂饲料喂养结合冠状动脉血管内皮损伤的方法建立痰瘀互结证冠心病小型猪模型。具体方法：小型猪以高脂饲料喂养2周，每天每只900 g，在高脂饲料喂养的基础之上，用介入法行冠状动脉血管内皮损伤。具体操作：耳静脉注射戊巴比妥钠（30 mg?kg-1）麻醉后，分离右侧颈总动脉，结扎远心端，置入6F动脉鞘管，从动脉鞘管的侧管注入肝素200 U?kg-1。在C型臂X光机透视下，以6F 35 L右冠导引导管置于左冠状动脉开口行左冠状动脉造影，观察猪冠状动脉的分布情况，造影后置入交换导丝，将导丝置入冠状动脉前降支（left anterior descending branch，LAD）中部，将球囊沿导丝进入LAD中部。根据实验动物间LAD血管直径的差异