生物测定法在丹参亲水凝胶骨架片体外释放评价中应用研究.docVIP

生物测定法在丹参亲水凝胶骨架片体外释放评价中应用研究 　　[摘要] 该研究探讨生物活性测定法在中药缓控释制剂评价中应用的适宜性，建立一种快速的多组分制剂体外释药评价方法，用表征总体行为的生物活性测定法代替目前单一成分的药物释放度测定法，以更好地指导缓控释制剂处方设计。通过HPLC测定不同溶出介质，不同释药速率及成分间不同配伍比例的丹参亲水凝胶骨架片中各有效成分（丹酚酸B、原儿茶醛、迷迭香酸）的累积释放度及紫外分光光度法测定释放液的抗氧化活性，对药物各成分经时曲线与总抗氧化活性经时曲线之间的相关性进行评价。发现各成分的释放曲线与抗氧化活性经时曲线的相关系数r均大于临界r=0.898（P　　[关键词] 生物测定法；体外释药；抗氧化活性；亲水凝胶骨架片；多组分制剂；丹参 　　[收稿日期] 2013-04-20 　　[基金项目] 国家自然科学基金项目；国家重点基础研究发展计划（973）项目（2012CB724000）；国家“重大新药创制”科技重大专项（2012Z009，2012Z027） 　　[通信作者] 王智民，研究员，主要从事中药药效物质基础及质量评价研究，Tel/Fax：（010E-mail：zhm123@263.net；刘晓谦，博士，主要从事中药制剂研究，E-mail：lianyu1127@126.com 　　[作者简介] 李东影，硕士研究生，E-mail：lidongyin126.com 　　近年来，随着疾病谱和临床用药的改变，以单靶点直接对抗治疗为代表的新药研发模式面临着严峻的挑战，而基于系统生物学多靶点、多组分药物的研究已经成为新药开发的热点。尤其是随着缓控释制剂优势的不断凸显，含有多组分的口服缓控释给药系统已成为新型给药系统研究的热点。但随之而来的如何真实、客观地评价多组分缓控释给药系统的综合作用特点，反映制剂的内在质量，成为制约多组分缓控释制剂发展的瓶颈。现有的通过对1个或几个指标成分或有效成分的释药数据进行体外释药评价模式，难以反映制剂的整体行为，因而难以指导多组分制剂的药物设计。本研究以临床基础较好的中药――丹参为研究对象，探索建立一种快速、灵敏、高效的，能够反映多组分制剂整体释药特性的方法。 　　丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎[1]，具有活血祛瘀[2]、凉血清心、养血安神的功效。现代药理研究已证实酚酸类成分为其抗老年痴呆[3]、降糖降脂、抗动脉粥样硬化[4]、抗肿瘤[5]、抗肝纤维化[6-7]、镇痛[8]及神经保护[9]作用的药效成分；而上述疾病的发生发展均与自由基、氧化应激等环节或机制密切相关[10-11]。这些酚酸类成分在体内易于被消除，如丹酚酸B的半衰期约9 min，具有开发为缓控释制剂的可行性。本研究以丹参的主要水溶性酚酸类成分为对象，通过制备不同释药速率、不同成分间配伍比例的缓释制剂，对其释药性能、释放过程中抗氧化经时曲线进行研究，探讨其相关性，进而探索抗氧化活性在评价多组分缓释制剂体外释药过程中的可行性和适用性。 　　1 材料 　　Shimadzu LC 20A高效液相色谱仪，包括LC-20AT溶液传输单元，SIL-20A自动进样器，SPD-M20A二极管阵列检测器，LC Solution色谱工作站（日本岛津公司）；T6 新世纪 UV-VIS分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；SR8PLUS全自动溶出仪（美国汉森）。KQ-250DE型数控超声波清洗器（功率250 W，工作频率40 kHz，昆山市超声仪器有限公司） ；XS205型1/10万天平（瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司）。 　　原儿茶醛（批号0810-9402）、迷迭香酸（批号111871-201001）均购自中国食品药品检定研究院；丹酚酸B（批号D-012-110812）购于成都瑞芬思生物科技有限公司；DPPH试剂（Lot # AL030101）购于Alfa Aesar公司；丹参骨架片（自制）。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱方法 　　2.1.1 色谱条件[12-13] Kromasil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相乙腈（A）-3%甲酸溶液（B），梯度洗脱，0～80 min，0%～33%A，流速 1 mL?min-1；柱温30 ℃；检测波长280 nm；进样量10 μL。 　　2.1.2 供试品溶液的制备 取本品10片，研细，精密称取15 mg，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声溶解，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，立即经0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。 　　2.1.3 专属性试验 取丹参骨