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地表水系除锰菌株筛选和除锰能力比较 　　摘 要：该研究从高锰地区地表水系的水样和淤泥中分离得到了6株具有Mn（II）氧化能力的菌株MBR1～MBR6，利用甲醛肟法对6株菌株的除锰能力进行比较，发现MBR6MBR5MBR3MBR1MBR2MBR4，其中MBR3、MBR5和MBR6的除锰率均在30%以上，具有进一步研究价值。 　　关键词：地表水系 甲醛肟法 除锰 　　中图分类号：X172 文献标识码：A 文章编号：1007-3973（2013）009-142-02 　　锰元素是地球地壳的主要成份之一，在自然界广泛分布，当水中的锰含量超过一定标准时，会对工业、生活及环境产生不利的影响，甚至表现出严重的生理毒性，对人产生慢性毒害。Mn（II）多存在于地下水中，但随着经济的快速发展，厂矿污水的排放，加上全球气候恶化，洪涝灾害频繁发生，大量的含锰物质被冲刷流入河流，导致地表水中的锰含量不断升高。地表水锰污染已成为给水处理中一个亟待解决的问题。 　　目前国内外除锰工艺的研究领域主要针对地下水，已取得丰富的成果，在法国、德国、保加利亚等国家的试验性利用已取得良好的成效。但地表水方面一直未受到特别重视，从而未进行系统理论的研究。近年来世界各地及我国先后发现，众多大小地表水系不同程度地受到锰的污染。由于地表水在含氧量、酸碱度、水系条件等方面与地下水有着很大区别，针对地下水的生物除锰工艺处理地表水时有着很大的局限性。因此筛选适合地表水系的具有除锰能力的菌株，研究其对Mn（II）的氧化去除能力有着巨大的社会经济效益，同时为除锰工艺的理论系统化发展进一步奠定基础。 　　1 实验材料 　　样品为重庆“锰三角”附近厂矿周边地表水中取得水样和淤泥，用无菌瓶保存后带回实验室进行分离鉴定。 　　PYCM液体培养基：蛋白胨0.8g，酵母浸膏0.2g，MnSO4?H2O 0.2g，K2HPO4 0.1g，MgSO4?7H2O 0.2g，NaNO3 0.2g，CaCl2 0.1g，（NH4）2CO3 0.1g，定容至1000mL，pH值7。 　　PYCM固体培养基：1000mL PYCM液体培养基中加入15g琼脂。 　　Mn（II）母液：MnSO4?H2O 0.614g，定容至200mL，终浓度1000mg/L。 　　TEST培养基：蛋白胨0.2g，酵母浸膏0.1g，NaCl 1.314g，KCl 0.056g，MgSO4?7H2O 0.924g，CaCl2 0.083g，定容至1000mL。加热灭菌，冷却后加入已过滤除菌的10.1mL的1M HEPES母液。 　　2 实验方法 　　2.1 样品的分离纯化 　　取10mL样品悬浮液梯度稀释后涂布PYCM平板，置于25℃下培养15天，挑取棕色菌落，多次划线分离后得到单克隆。用0.5% 盐酸四甲基对苯二胺溶液滴加分离的菌落，初步检测其锰（II）氧化能力。 　　2.2 菌株除锰能力测定 　　利用甲醛肟分光光度法测定。 　　2.2.1 标准曲线绘制 　　配置浓度分别为0mg/L，2 mg/L，5 mg/L，10 mg/L，20 mg/L，40 mg/L，60 mg/L，80 mg/L和100 mg/L的Mn（II）标准液。取1mL标准液，加7mL H2O，0.1mL Na2-EDTA溶液，0.1mL甲醛肟溶液，0.36mL NaOH溶液，摇匀后静置10分钟，加入0.6mL 氨-盐酸羟胺溶液后加水定容至10mL，摇匀后再静置20分钟，随后利用分光光度计以纯水作为对照，于450nm光下测量反应液的OD值，绘制标准曲线。 　　2.2.2 待测菌株样本制备 　　将待测菌株用1mL PYCM液体培养基25℃培养48小时后，利用10mM Tris?HCl缓冲液反复离心清洗，最后悬浮稀释至相同菌体浓度，OD610为1.0。 　　取4.65mL TEST培养基，加入250 L Mn（II）母液，再加入100 L稀释菌液。对照组加入100 L ddH2O。25℃振荡培养48小时。 　　2.2.3 待测菌株除锰能力测定 　　将培养结束的菌株和对照转移至离心管中，3000?g离心10分钟，取上清液1mL，按照甲醛肟法测定吸光度OD450。 　　3 结果与分析 　　3.1 除锰菌株的分离筛选 　　通过对3处高锰地区地表水系采集的水样和污泥样本的梯度稀释后涂布在PYCM固体培养基上，挑选棕黄色菌落，经多次划线纯化培养获得除锰菌株6株，MBR1，MBR2，MBR3，MBR4、MBR5和MBR6，滴加0.5%盐酸四甲基对苯二胺溶液的对应菌落颜色呈深蓝色。 　　当具有锰氧化能力的菌株在含有Mn（II）的PYCM培养基中生长时，能将培养基中的Mn（II）氧化为Mn（IV），形成棕色沉淀，使菌落表现出棕黄色。因此挑选棕黄色菌落更易从生态菌群中找到具有锰氧化能力