肝癌抗原肽(EPVTKAEML)与人HSP70融合基因构建及原核表达.docVIP

肝癌抗原肽(EPVTKAEML)与人HSP70融合基因构建及原核表达 　　摘要：目的： 构建及原核表达肝癌抗原肽（EPVTKAEML）与人热休克蛋白70（HSP70）的融合基因。方法： 采用加端PCR方法， 将EPVTKAEML的基因序列融合到人HSP70基因的3′端； 将融合基因克隆入原核表达载体pET28a（+）中， 构建重组质粒pET28a（+）/EPVTKAEMLHSP70。经限制性内切酶BamH I、 Xho I双酶切鉴定及序列测定后， 转化E.coli BL21（DE3）， 经IPTG诱导表达融合蛋白， SDSPAGE检测表达结果。结果： 应用加端PCR方法扩增出约2.0 kb的目的片段， 序列测定结果证实， EPVTKAEML的基因序列成功地融合到人HSP70基因的3′端。经BamH I、 Xho I酶切鉴定证实， 融合基因成功地克隆到原核表达载体pET28a（+）上； 转入重组质粒的E.coli BL21（DE3）经IPTG诱导后， SDSPAGE分析发现在相对分子质量（Mr）约72000处有表达量明显增多的蛋白条带。结论： 成功地构建并表达了肝癌抗原肽（EPVTKAEML）与人HSP70的融合基因。 　　关键字：肝肿瘤/免疫学抗原肿瘤/遗传学表位热休克蛋白类70/遗传学基因表达 　　原发性肝癌是严重危害我国人民身体健康的恶性疾病之一。近几十年来， 尽管诊疗手段有