内科学(消化)专业毕业论文 [精品论文] 散发性结直肠癌传统型锯齿状发生通路的部分临床特征及分子改变的研究.docVIP

内科学(消化)专业毕业论文 [精品论文] 散发性结直肠癌传统型锯齿状发生通路的部分临床特征及分子改变的研究关键词：结直肠癌 锯齿状腺瘤 传统腺瘤 锯齿状大肠癌 BRAF变异摘要：大肠癌是世界范围内死亡率居第三位的恶性肿瘤。近80％散发性大肠癌是由腺瘤性息肉引起的，而增生性息肉，一直以来认为其不会引起恶变。但近年来人们注意到大肠内存在一系列锯齿状结构的病变，统称为锯齿状病变(serratedlesions)，包括：畸形隐窝灶(ACF)；锯齿状息肉[又可分为增生性息肉(HP)、无蒂锯齿状腺瘤(SSA)、混合性息肉(MP)、传统锯齿状腺瘤(TSA)]；锯齿状腺癌(SCa)，其与部分散发性大肠癌密切相关。Hawkins提出可能存在“增生性息肉-锯齿状腺瘤-癌”这样一条结直肠癌发生途径，即锯齿状瘤形成途径，晚近更有学者认为可能存在两条平行的、几乎很少交叉的锯齿状通路，即：传统锯齿状通路和无蒂锯齿状通路。这一概念的提出是对散发性结肠癌发生的经典“腺瘤-癌”成瘤途径的重要补充，有着重要的临床价值，因此，围绕SA展开研究工作很有必要。目前国内对此类病变的研究很少，国外研究多集中于SA的组织发生学、形态学、分子遗传学以及临床意义等方面。 [目的]： 1．了解TSA的一些临床特征，并与AD比较，寻找不同点； 2．通过比较TSA、AD、SCa、非锯齿状CRC四类病理组织的特异性分子标记(MSI、Braf V600E变异)，希望能够间接验证传统型锯齿状通路的存在。 [方法]： 1．复习2003年至2005年我院病理科所有大肠息肉的切片，重新诊断TSA，然后收集整理相关临床资料，并与AD组对比，统计分析二者差别； 2．另复习部分大肠癌切片，诊断SCa，选取15例SCa、20例非锯齿状大肠癌、20例AD、20例TSA蜡块，每张蜡块以10μm厚度连切10张，显微切割挑出所需部分，置于1.5ml离心管中，二甲苯脱蜡，然后蛋白酶K消化，以离心柱型DNA提取试剂盒，按照操作说明，提取DNA，分装后-20℃保存备用； 3．将以上获得的DNA，分别取适量，采用特异的荧光标记引物，通过PCR法扩增微卫星片段BAT25和BAT26，所得产物经琼脂糖凝胶电泳验证后，应用ABI3130全自动DNA测序仪和Genemarker1.65软件进行分析，观察这2个微卫星片段长度的变化，判断得出MSI结果，继而统计分析TSA、AD、SCa、非锯齿状癌四组标本的MSI差异； 4．仍以第2步所得DNA适量为模板，按文献设计引物，PCR扩增Braf基因exon15片段，所得产物经琼脂糖凝胶电泳验证后，选用TsprI行限制性酶切反应筛查Braf V600E变异，对筛查为阳性的标本再测序验证，最后统计分析四组标本Braf变异有无差异，得出结论。 [结果]： 1．共检出1200张大肠息肉切片，其中传统型锯齿状腺瘤29例，占全部息肉2.42％，另还有24例增生性息肉、5例无蒂锯齿状腺瘤、2例HP/SA混合型息肉。比较传统腺瘤与传统型锯齿状腺瘤的部分临床特征，发现：TSA患者平均年龄较传统腺瘤患者小(56.0vs62.7，P=0.0336)；在直乙结肠，TSA的发生率要高于传统腺瘤(62.07％vs35.21％，P=0.0252)，而在降结肠则刚好相反(0 vs25.35％，P=0.0068)，其余部位二者构成比无统计学差异；在性别组成及息肉平均直径、蒂部情况二者亦无明显差异(P＞0.05)。 2．Sca在散发性CRC中所占比例为15％。 3．MSI检测情况：有部分标本检测失败，对余下标本统计，18例TSA中共有6例为MSI-H，12例为MSI-L/MSS；18例AD均为MSS；13例SCa中，共有3例为MSI-H，10例为MSI-L/MSS；19例非锯齿状肠癌中1例为MSI-H，18例为MSI-L/MSS，经x2统计分析发现，MSI发生频率AD组、非锯齿状肠癌组明显低于SA组、SCa组(P＜0.05)，而后两组间则无明显差异(P＞0.05)。 4．Braf变异检测情况：有部分标本检测失败，对余下标本统计，15例SA中共有4例发生Braf V600E变异；11例SCa中，共有4例发生Braf V600E变异；11例AD及14例非锯齿状肠癌中则无1例发生BrafV600E变异。Braf变异发生频率AD组、非锯齿状肠癌组均明显低于SA组、SCa组(P＜0.05)，而后两组间则无明显差异(P＞0.05)。 [结论]： 1．SA与AD在患者年龄、发生部位存在差异，但仅凭临床特征尚难以进行区分，确诊仍需病理诊断； 2．MSI-H、BRAF V600E变异在AD组、非锯齿状肠癌组均明显低于SA组、SCa组，而后两组间则无明显差异； 3．由以