Quanta SC中文培训教程.doc

多功能细胞分析系统Quanta SC 培训教程 美国贝克曼库尔特有限公司 生命科学部细胞组学 Quanta SC 用户培训大纲 预期目的：通过第一次培训后能够达到以下要求： 1，了解Quanta SC的基本原理及不同于其它流式细胞仪的特点 2，了解Quanta SC的基本结构、开关机程序及常规保养 3，了解Cell Lab Quanta SC软件结构并能运用各项功能 4，掌握DNA检测的原理及基本要点，熟悉基本的标本制备过程，能够进行方案设计并能检测标本 5，掌握细胞存活率检测的原理及标本制备和检测过程 6，掌握单标记及多标记免疫荧光标记的原理及基本要点，熟悉基本的标本制备过程，能够进行方案设计并能够检测标本 7，了解并掌握仪器质控的几个步骤以及相关质控品 8，了解流式细胞仪的基本应用 培训内容及课时安排(每半天为一个教学课时) 第一课时： 1，Quanta SC的基本原理及应用概述 2hr 结构及各部件功能： 激光，汞弧灯，流动室，注射泵，鞘液，光学系统，光电倍增管，电压及增益，放大方式，阈值，检测信号种类，荧光染料种类，分色方式，道数，直方图等 应用：科研 2，硬件及软件介绍 第二课时 3，开机步骤，按照操作向导提示进行，FLOW_CHECK原理及光路与流路校准操作，练习调电压，熟悉电压变化引起的信号强度变化 4，练习建立方案 第三课时 5，免疫荧光(单标记)：原理，方案，同型对照设定，Q_PREP或OptiLyse_C使用，CytoTrol或ImmunoTrol及全血标本制备，检测，练习调电压 (2~3hr) 第四课时 6，免疫荧光(双标记)：方案，同型对照设定，颜色补偿原理及补偿设定，分别练习手动和自动调节，全血标本练习(2~3hr) 第五课时 7，免疫荧光(三标记)，示范及练习(1~2hr) 8，质控品及质控介绍： FlowCheck，FlowSet，CytoTrol，ImmunoTrol 9，总结及试剂介绍 第六-七课时 10，DNA检测及分析： 检测原理，方案设计，标本制备（包括利用488nm激发的PI和紫外激发的DAPI），标本检测 11，数据保存和分析 12，熟悉软件中的其它选项 13，应用介绍 流式细胞术(Flow Cytometer) 流式细胞术(FlowCytometry,FCM)是利用流式细胞仪对细胞等生物粒子的理、化及生物学特性进行分析的方法。它集中了单可隆抗体技术、激光技术、计算机技术、细胞化学和免疫化学技术。利用流式细胞仪可以对细胞等生物粒子的理化及生物学特性(细胞大小、DNA含量、细胞表面抗原表达等)进行定量、快速、客观、多参数相关的检测。 Quanta SC概述 Quanta SC是贝克曼库尔特公司最新推出的新型的多功能流式细胞分析系统，Quanta SC是第一台也是迄今唯一的一台具有库尔特体积参数的流式细胞分析系统，它同时能检测3色荧光信号，而且还有侧向散射光信号。Quanta SC能不依赖荧光微球进行单平台绝对计数，实现了在流式细胞系统上无成本的单平台绝对计数，另外还有两个独特的荧光参数：荧光浓度和荧光表明密度。非常适合细胞学的科学研究。 为了使其应用领域更加广泛，Quanta SC配置有2个光源，488nm的激光和汞弧灯，而且汞弧灯有365、405和435的激发波段，Quanta SC的滤片可根据选择的染料不同随时更换，应用更加灵活。Quanta SC的液流传输系统是注射泵，所以能精确测量通过样本的浓度。 Quanta SC工作原理 光源：激光(488nm 固体激光)，汞弧灯（365nm，405nm，435nm） 流动室：专利的三角形流动室 液流传输系统：注射泵 细胞：单细胞悬液 检测器： 光电倍增管(PMT)，光电二极管 检测信号：电子体积（EV），散射光(SS)，荧光信号(FL1~FL3) 统计分析及结果输出： 计算机（Windows XP） 光源：激光，汞弧灯 多种激发光决定了应用的多样性。汞弧灯的366nm是激发DAPI 和Hoechst等用于DNA倍体分析的理想光源，405 和 435 nm可用于检测CFP。488 nm激光的功率可调，2-22 mW，可根据检测信号的不同随时调整，488nm激发的染料有FITC，PE，PI，7AAD，Syber Green，Syto 9，PC5，PC7，GFP，YPF，RFP等。 流动室：专利的三角形流动室 当液流喷入流动池时，位于三个池角的鞘液因具较高剪切力逼使单细胞液束聚集于池中央，使得单细胞流束更为稳定。这点在进行细胞周期检测分析时尤为重要。 液流传输系统：注射泵 Quanta SC采用了精确的Hamilton注射器将细胞悬液准确注入流动室并精确计算注入体积，从而