分子育种研究分析.pptVIP

试验路线 试验路线 试验路线 培养过程中利用标记基因筛选 试验路线 原理：β－Ｄ－葡萄糖酸苷酶基因（Gus），催化β－葡萄糖苷酯类物质水解。其中很多水解产物具有发色团或形成荧光物质。 例：组织化学法测定Gus活性 作用底物为X-gluc,产物是一种不可溶的5,5-二溴，4,4-二氯靛蓝； 标记基因 选择标记基因(Slective gene) 报告基因(Report gene) 抗生素类选择基因 抗除草剂类选择基因 生物安全性标记类选择基因 …… β-D-葡萄糖酸苷酶基因(Gus)荧光素酶基因(Luc) 氯霉素乙酰转移酶基因(Cat)绿色荧光蛋白基因(GFP) …… 筛选与鉴定 Gus检测 试验路线 检测 外源基因整合 外源基因拷贝. 外源基因表达 PCR-Southern杂交 IPCR RT-PCR 转基因植物的PCR检测 试验路线 Southern 杂交 Northern 杂交 Northern 杂交 原位杂交 杂交鉴定 Thank you ! L/O/G/O 研究背景 在花色育种中的应用 1 在形态育种中的应用 2 在抗性育种中的应用 3 在花卉保鲜育种中的应用 4 在花色育种中的应用 花色是花卉最重要的观赏性状之一 花色主要由三大类色素决定 类黄酮、类胡萝卜素和甜菜色素 利用反义RNA 抑制基因的活性，使花的颜色变浅 引入外源基因来补充某些品种缺乏合成某些颜色的能力，使颜色变深 包括花器官结构、花枝着生状态、花序类型、植株形态等的改良 转rolC 基因菊花品种表现为丛生、矮化，叶多分裂 将DOH1 基因以反义形式导入石斛，获得分枝性强且矮化的转基因石斛 1 2 3 在形态育种中的应用 蛋白酶抑制剂基因 包括抗虫和抗病性 应用最广泛的是Bt 基因 几丁质酶基因 1 2 3 4 在抗性育种中的应用 在花卉保鲜育种中的应用 乙烯合成对于延长保鲜期、提高切花品质至关重要 1 ACC 合成酶和ACC 氧化酶 2 ACC 合成酶基因早于ACC 氧化酶基因 3 导入反义ACC 合成酶基因及反义ACC 氧化酶基因 4 分子育种应注意的问题 分子育种与传统育种方法需紧密结合 1 加强部门、行业、学科间的交流与合作 2 把目的基因的开发利用与花卉基因文库的保存紧密地结合起来 3 加强国际合作，借鉴已有的研究成果，少走弯路 4 无法以种子繁殖或种子繁殖后代明显变异分离的、传统的嫁接方式也不能从根本上改变花卉品种 重点研究的是将抗病、抗虫、抗冻、抗热基因引进到花卉植株中来，通常统称为抗逆基因的导人。 如何将抗逆基因导入到花卉植株中，从而获得抗逆基因新品种，直接关系到花卉生产的利益。 应用范围 研究重点 研究意义 分子育种的目的及意义 花卉分子育种的主要内容 改良类型 B E C D A 花色 花形 花期 保鲜 花香 研究思路与设想 1 2 3 将目的基因分离出来,构建重组分子导入植物,筛选获得目的基因表达的后代 将带有目的性状基因的供体总DNA 片段导入植物,筛选带目的性状的后代,培育新品种 利用化学合成或PCR，体外克隆出目的基因 包括已知基因和未知基因 试验路线 花卉转基因 花卉遗传育种 突变体筛选 试验路线 目的基因 宿主植物 表型筛选 克隆 转化 鉴定 研究思路与设想 克隆出目的基因的ORF 构建重组质粒载体 组织栽培与筛选 载培育种 转化组织 构建基因组文库 ①化学合成法 ②PCR扩增 构建cDNA文库 已知基因 的获得 未知基因 的获得 试验路线 试验路线 受体材料的 准备 植株 幼胚 根细胞培养 愈伤组织 试验路线 遗传转化 直接转化法 其他 间接转化法 试验路线 直接转化法 基因枪 PEG介导 电击 花粉管通道 带有转化基因的农杆菌活化 受体植物 叶盘 侵染 共培养 筛选培养 诱导成苗 预培养叶盘，或愈伤组织 转化组织 炼苗