6细菌与噬菌体的重组作图.ppt

4.5 细菌的遗传分析和基因定位 细菌作为遗传研究对象的特点 结构简单：属于原核生物，无明显细胞核，染色体裸露，不与组蛋白结合，不进行减数分裂。 世代周期短：20分钟一代 容易获得各种突变型 ① 合成代谢缺陷型(营养缺陷型) ② 分解代谢缺陷型 ③ 抗性突变型 易培养，可长期保藏 细菌之间遗传物质的转移方式 转化：细胞从周围介质中吸收裸露的DNA。 接合：DNA从供体菌到受体菌直接转移。 转导：由噬菌体所介导的DNA从供体菌到受体菌的 转移。 4.5.1 细菌的转化和基因定位 转化的类型 ①自然转化（natural transformation） 细菌能够自然地吸收DNA，如枯草杆菌的转化。 ②工程转化（engineered transformation） 通过某种处理使细菌能够摄入外源DNA，如大肠杆菌 的转化。 转化效率：约1％ 转化片段的长度：20kb 转化在基因定位中的应用 判断两个基因的位置关系 ①观察DNA浓度降低时AB基因共转化频率的下降和A、B各自转化频率下降的程度： 程度相同表明 ；共转化频率下降的程度远大于各自转化频率下降的程度，表明 。 ②观察转化频率： AB共转化频率与A、B各自转化的频率相近，表明 ；相差很远，表明 。 基因作图：判断基因间的距离 计算重组值 遗传作图 4.5.2 细菌的接合与基因定位 一、接合现象的发现 1946年，莱德伯格(Lederberg) 和塔特姆 (Tatum) A菌株：met－ bio－ thi＋ leu＋ thr＋（thi：硫胺素B1） B菌株：met＋ bio＋ thi－ leu－ thr－ 原养型：met＋ bio＋ thi＋ leu＋ thr＋ A菌株：met－ bio－ thi＋ leu＋ thr＋（thi：硫胺素B1） B菌株：met＋ bio＋ thi－ leu－ thr－ A A+B B 基本 培养基 原养型：met ＋ bio ＋ thi＋ leu＋ thr＋ 分析原因 发生了回复突变？ 可能是转化的结果。 培养基中含有某些代谢产物，混合后这些产物互相补充了对方的不足而得以在基本培养基上生长。 二、遗传物质的转移方向 结论：接合过程是一种单向转移，从供体到受体。 三、F因子 1. F 因子：致育因子（性因子） 携带F因子的菌株称为供体菌或雄性，用F＋表示。 未携带F因子的菌株为受体菌或雌性，用F－表示。 2. F 因子的组成： ①复制区 (含2个复制起点oriT,oriV)； ②致育基因区； ③配对区（含有4个IS） 3. F因子的转移： 4. F+×F-的特点： (1) F因子转移的频率高，1/10，使F-→F+。 (2) 染色体重组频率低；10-6 。 (3) F+×F+不发生接合。 因此，F+品系又称为低频重组品系(low frequency recombination，Lfr)。 四、高频重组 (Hfr) 1.Hfr的形成及转移过程 由F因子和细菌染色体的单交换产生； 转移时带有供体细菌的染色体。 2.Hfr的特点 ： (1)染色体重组频率高，比 F+×F- 高1000倍； (2)F因子转移频率低， F-→F+ 很少或没有。 3.Hfr和F+的联系和区别 联系： 都是雄性菌，含有F质粒 区别： （1）前者高频重组，后者低频重组； （2）前者F因子转移频率低，后者F因子转移频率高； （3）前者F因子整合，后者F因子游离。 五、中断杂交作图 根据供体基因进入受体细胞的顺序和时间绘制连锁图的技术。 1961年 Jacob 和 Wollman 供体HfrH ：strs thr＋leu＋azir tonr lac＋ gal＋ 受体F－ ：strr thr－leu－azis tons lac－gal－ 操作方法：37℃混合培养 每隔一段时间取样 搅拌器中断杂交 涂布含链霉素的基本筛选培养基 影印培养于含链霉素的几种不同的培养基（选择培养基）上