清营口服液安全性和临床药效研究.docVIP

清营口服液安全性和临床药效研究 　　摘 要：为验证新药清营口服液的安全性和有效性，进行了Wistar大鼠的安全性试验和SPF鸡临床疗效试验。在40～10 g/kg b.w.剂量范围内，经口给予清营口服液30 d后，检查Wistar大鼠的一般生理状态及血液生理、生化指标，并进行病理解剖及病理组织学检查。结果表明清营口服液各剂量组所有检测指标，与阴性对照组无显著差异（P0.05），且对Wistar大鼠的生长发育未产生影响，较长期重复应用无亚急性毒性，说明该药安全性较强：通过对比清营口服液试验组和氟苯尼考对照组对SPF鸡的疗效发现清营口服液组能够对体内注射的大肠杆菌起到较好的抑菌和杀菌效果，从试验鸡的死亡率和分菌结果可以看出清营口服液总体预防和治疗效果好于氟苯尼考，说明清营口服液有较好的临床抗菌效果。 　　关键词：清营口服液；大鼠；安全性试验；大肠杆菌；抗菌效果 　　中图分类号：S853.76 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2014）04-0117-04 　　清营口服液是山东省农业科学院家禽研究所研制的新型中兽药口服液，其处方主要来源于中医清营凉血的著名经方清营汤，功效为清营解毒，透热养阴，主治温热病邪传入营分证。本实验室通过临床试验发现，清营口服液对治疗鸡大肠杆菌病具有切实疗效。中医药是祖国医学的瑰宝， 且被广泛应用于临床工作中，长期以来， 许多人认为中药药性缓和， 毒副作用小而安全， 中药临床应用的安全问题不够重视。但近年关木通、龙胆泻肝丸致急性肾衰竭[1]，双黄连注射液、鱼腥草注射液致过敏休克[2，3]等不良反应报道，使人们对中药应用的安全性产生了怀疑。为了解新药清营口服液在使用过程中的安全性，进行了Wistar大鼠相关安全性试验，并采用SPF鸡为实验动物验证其抗菌疗效。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　1.1.1 试验动物 健康Wistar大鼠80只，体重140～180 g，雌、雄各半，购自山东省实验动物中心。7日龄SPF鸡，平均体重105.5 g，购自山东昊泰特种动物繁育有限公司。 　　1.1.2 试验菌株 大肠杆菌，编号09-29，血清型O24，山东省农业科学院家禽研究所保存。 　　1.1.3 试验药品和试剂 清营口服液，山东省农业科学院家禽研究所研制，由犀角、生地黄、玄参、黄连、金银花、甘草等组成，委托烟台绿叶动物保健品有限公司生产，批号生药含量2 000 mg/mL。氟苯尼考可溶性粉，山东昊泰科技药业有限公司生产，批含量为10%。哺乳动物血常规分析配套试剂，生化指标测定配套试剂，组织标本固定用试剂，普通固、液体培养基。 　　1.1.4 主要仪器 OLYMPUS Au2700全自动生化分析仪、Sysmex F-820型全自动血常规分析仪、生物显微镜、紫外分光光度计、离心机、组织切片机、超净工作台、振荡摇床、恒温培养箱、隔离器等。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 安全性试验 ①清营口服液对大鼠自然状况和体重的影响：本试验受试药物清营口服液对Wistar大鼠的经口最大耐受剂量（MTD）大于40 g/kg b.w.。因此本试验将80只健康Wistar大鼠随机分为高（40 g/kg b.w.）、中（20 g/kg b.w.）、低（10 g/kg b.w.）3个剂量组和1个阴性对照组，每组20只，雌雄各半。剂量组连续经口给药30 d，阴性对照组给予相同量的无菌蒸馏水灌胃，每日给药和灌胃时间一致。试验期间，每天观察记录大鼠的一般行为表现、中毒及死亡情况，每7天测量记录试验大鼠体重、投入饲料量及剩余饲料量。 　　②血液生理、生化指标测定：试验结束后各组取20只大鼠（雌、雄各半）采血样，用全自动血液生理指标分析仪和自动血液生化指标分析仪分别测定血液生理和生化指标。血液生理指标包括：红细胞数（RBC）、白细胞数（WBC）、血红蛋白（HHb）、血小板数（PLT）、单核细胞数、嗜酸性粒细胞数。血液生化指标包括：谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、肌酐（CRE）、血糖（GLUC）、总蛋白（TP）、血清白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）等。 　　③病理学检查：采血结束后，对各组大鼠（雌、雄各半）进行剖检，观察病变并做好记录；剖检大鼠的同时，称量各主要脏器（包括肝、肾、脾、睾丸）重量，计算各脏器的相对重量（脏/体比值）；取高剂量组剖检20只大鼠心、肝、脾、肾、胃肠、睾丸、卵巢和胸腺组织，石蜡包埋，切片，H-E染色，于普通光镜下观察有无病理变化，若发现病变再对较低剂量组大鼠的相应器官及组织进行检查。 　　1.2.2 临床药效试验 ①临床试验方法：将60只SPF雏鸡，平均分成4组，每组15只，分别为清营口服液试验组、氟苯尼考试验