探针的标记物放射性同位素.PPT

化学发光检测??能通过X 光片记录下很轻微的信号 1、使用封闭剂对杂交后的膜进行处理,以阻止抗体对膜的特异性吸引, 2、加入结合有碱性磷酸酶的抗地高辛半抗原的抗体(Anti-DIG-AP) ,形成酶联抗体-半抗原复合物, 3、加入化学发光底物CSPD或CDP-StarTM,使其与膜上的杂交探针所结合的抗体复合物充分反应, 4、最后在X光片上曝光,以记录化学发光信号。 化学发光检测在尼龙膜上的效果优于在纤维素膜上的效果。 地高辛标记探针的显色检测 地高辛标记探针的显色检测 化学显色 显色原理相同，显色底物是5-溴-4-氯-3 吲哚酚磷酸盐(也称X-磷酸盐，BCIP) 和氮蓝四唑盐(NBT)，它与酶联抗体-半抗原（Anti-DIG-AP）复合物在酶促作用下发生反应，于数分钟内开始呈现蓝紫色，随时间延长，颜色逐渐变深，通常于24h终止反应。 如用坚固红(FR／AS-MX)产生的底物为玫瑰红色，用坚固蓝(FB／AS-MX)则产物为紫绿色，而BCIP／NBT为紫蓝色 地高辛标记的核酸探针较稳定，根据告在-20℃储存可达2年，随时可以取用，不像放射性标记的探针有半衰期所致的时间限制。 现实应用中，人们仍喜欢采用新鲜的地高辛配基标记3~6个月以内的核酸探针。 为节省核酸探针的用量，凡使用过的含有探针的 杂交液也可反复多次使用，特别是对于已知的重复性实验，对于细胞或组织内